| 英文缩略词 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1 松弛素家族的研究现状 | 第13-17页 |
| 1.1 松弛素家族 | 第13-14页 |
| 1.2 松弛素结构 | 第14-15页 |
| 1.3 松弛素生物学作用 | 第15-16页 |
| 1.4 Rln3基因研究现状 | 第16-17页 |
| 2 鱼类的生殖细胞 | 第17-21页 |
| 2.1 鱼类的PGC | 第18页 |
| 2.2 鱼类PGC在性别决定中的作用 | 第18-19页 |
| 2.3 原始生殖细胞的标记基因 | 第19-20页 |
| 2.4 减数分裂的调控 | 第20页 |
| 2.5 体细胞中的各种因子对性别分化的作用 | 第20-21页 |
| 3 硬骨鱼类渗透压的研究 | 第21-22页 |
| 3.1 硬骨鱼类渗透压调节的机制 | 第21页 |
| 3.2 内分泌激素对硬骨鱼类渗透压的影响 | 第21-22页 |
| 3.3 盐度对硬骨鱼类渗透压的调节机制 | 第22页 |
| 4 科学问题的提出和本研究的目的意义 | 第22-23页 |
| 第二章 尼罗罗非鱼relaxin3基因的分离及生物信息学分析 | 第23-33页 |
| 1 引言 | 第23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-25页 |
| 2.1 尼罗罗非鱼基因组本地比对数据库(本地blast)的构建 | 第23页 |
| 2.2 利用尼罗罗非鱼性腺的转录组测序克隆rln3基因 | 第23-24页 |
| 2.3 尼罗罗非鱼性腺转录组本地比对数据库的构建 | 第24页 |
| 2.4 尼罗罗非鱼rln3基因的分离和克隆 | 第24页 |
| 2.5 RLN3氨基酸序列比对分析 | 第24页 |
| 2.6 Rln3基因系统进化分析 | 第24-25页 |
| 2.7 Rln3基因共线性分析 | 第25页 |
| 3 结果分析 | 第25-29页 |
| 3.1 尼罗罗非鱼rln3基因的克隆和结构分析 | 第25-26页 |
| 3.2 尼罗罗非鱼rln3的氨基酸同源性分析 | 第26-27页 |
| 3.3 Rln3的系统发生分析 | 第27-28页 |
| 3.4 尼罗罗非鱼rln3基因的共线性分析 | 第28-29页 |
| 4 讨论 | 第29-33页 |
| 第三章 尼罗罗非鱼relaxin3基因表达分析 | 第33-47页 |
| 1 引言 | 第33页 |
| 2 材料、仪器与方法 | 第33-41页 |
| 2.1 实验动物 | 第33页 |
| 2.2 实验仪器 | 第33页 |
| 2.3 实验耗材 | 第33-34页 |
| 2.4 相关试剂的配置 | 第34-38页 |
| 2.4.1 LB液体培养基 | 第34页 |
| 2.4.2 LB固体培养基 | 第34-35页 |
| 2.4.3 50×TAE琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第35页 |
| 2.4.4 亚克隆相关试剂 | 第35-36页 |
| 2.4.5 原位杂交相关试剂 | 第36-38页 |
| 2.5 实验方法 | 第38-41页 |
| 2.5.1 总RNA提取 | 第38-39页 |
| 2.5.2 cDNA的合成 | 第39页 |
| 2.5.3 Real-Time PCR | 第39-40页 |
| 2.5.4 原位杂交过程 | 第40-41页 |
| 2.5.5 罗非鱼rln3组织表达模式分析 | 第41页 |
| 2.5.6 罗非鱼性腺个体发育过程中rln3的表达 | 第41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-44页 |
| 3.1 Rln3在各组织中的表达 | 第41-42页 |
| 3.2 Rln3在尼罗罗非鱼的个体发生 | 第42-43页 |
| 3.3 Rln3在尼罗罗非鱼的雄性性腺中的表达 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| 第四章 罗非鱼rln3基因功能的初步研究 | 第47-71页 |
| 1 前言 | 第47页 |
| 2 材料、仪器与方法 | 第47-54页 |
| 2.1 实验试剂和仪器 | 第47-48页 |
| 2.2 有关试剂的配制 | 第48页 |
| 2.3 实验方法 | 第48-54页 |
| 2.3.1 罗非鱼rln3a CRISPR/Cas9敲除 | 第48-53页 |
| 2.3.2 Rln3a突变F1代的建立 | 第53页 |
| 2.3.3 渗透压调控 | 第53-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-68页 |
| 3.1 敲除序列的选择以及突变检测 | 第54-56页 |
| 3.2 阳性敲除鱼的筛选和敲除效率统计 | 第56-58页 |
| 3.3 Rln3a突变检测 | 第58-66页 |
| 3.3.0 Rln3a 3月龄XY个体阳性鱼性腺的组织学观察 | 第58页 |
| 3.3.1 Rln3a 3月龄XY个体阳性鱼性腺的免疫组化检测结果 | 第58-60页 |
| 3.3.2 性腺生长指数GSI检测 | 第60页 |
| 3.3.3 Rln3a 5月龄XY个体阳性鱼性腺的组织学观察 | 第60-61页 |
| 3.3.4 Rln3a 5月龄XY个体阳性鱼性腺的免疫组化检测结果 | 第61-63页 |
| 3.3.5 Rln3a 8月龄XY个体阳性鱼性腺的组织学观察 | 第63页 |
| 3.3.6 Rln3a缺失阳性鱼相关基因变化 | 第63-64页 |
| 3.3.7 Rln3a缺失阳性鱼血清雄激素水平变化 | 第64-65页 |
| 3.3.8 Rln3a突变F1代鱼的检测 | 第65-66页 |
| 3.4 渗透压调控 | 第66-67页 |
| 3.5 本论文中所用到的引物 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-71页 |
| 结论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 在读期间发表论文 | 第83页 |
| 在读期间参加科研情况 | 第83页 |
