| 缩略语表 | 第7-10页 |
| 中文摘要 | 第10-14页 |
| ABSTRACT | 第14-17页 |
| 前言 | 第18-20页 |
| 文献回顾 | 第20-35页 |
| 1.HCC的发生及相关抑癌基因 | 第20-24页 |
| 2.MIRNA的生物学特性及在肿瘤发生发展中的作用 | 第24-31页 |
| 3.CSMD1在HCC中的研究进展 | 第31-35页 |
| 第一部分 MIR-10B在HCC中的表达以及临床意义 | 第35-42页 |
| 1 材料 | 第35-36页 |
| 1.1 HCC组织样本 | 第35-36页 |
| 1.2 主要试剂 | 第36页 |
| 1.3 主要仪器 | 第36页 |
| 2 方法 | 第36-39页 |
| 2.1 应用qRT-PCR技术检测miR-10b在进展期HCC中的表达 | 第36-39页 |
| 3 结果 | 第39-41页 |
| 3.1 RNA提取质量鉴定 | 第39页 |
| 3.2 q RT-PCR检测miR-10b在HCC中的表达变化 | 第39-40页 |
| 3.3 miR-10b在HCC中的表达水平与患者临床病理特征参数的关系 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| 第二部分 MIR-10B对肝癌细胞生物性状的影响 | 第42-57页 |
| 1 材料 | 第42-44页 |
| 1.1 细胞系 | 第42页 |
| 1.2 主要试剂 | 第42-43页 |
| 1.3 主要仪器 | 第43-44页 |
| 2 方法 | 第44-49页 |
| 2.1 应用qRT-PCR技术检测miR-10b在HL-7702、HepG2、SK-hep-1、Huh7中的表达情况 | 第44-45页 |
| 2.2 细胞转染 | 第45-46页 |
| 2.3 四甲基偶氮唑盐比色法（3-(4,5-Dimethyl2thiazolyl)-2,5-diphenyl2H-tetrazolium bromide, MTT）实验 | 第46页 |
| 2.4 Transwell 实验 | 第46-47页 |
| 2.5 划痕实验 | 第47页 |
| 2.6 平板克隆形成实验 | 第47页 |
| 2.7 软琼脂克隆形成实验 | 第47-48页 |
| 2.8 流式细胞术检测细胞周期和凋亡 | 第48-49页 |
| 2.9 统计学方法 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-55页 |
| 3.1 q RT-PCR检测miR-10b在正常肝细胞和肝癌细胞系中的表达变化 | 第49页 |
| 3.2 q RT-PCR检测细胞转染效率 | 第49-50页 |
| 3.3 miR-10b对HepG2细胞增殖能力的影响 | 第50-52页 |
| 3.4 miR-10b对HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响 | 第52-53页 |
| 3.5 miR-10b对HepG2细胞周期和凋亡的影响 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 第三部分 MIR-10B对裸鼠皮下成瘤的影响 | 第57-63页 |
| 1 材料 | 第57-58页 |
| 1.1 裸鼠 | 第57页 |
| 1.2 细胞系 | 第57页 |
| 1.3 主要试剂 | 第57-58页 |
| 1.4 主要仪器 | 第58页 |
| 2 方法 | 第58-60页 |
| 2.1 agomir-10b对裸鼠皮下成瘤的影响 | 第58-59页 |
| 2.2 统计学方法 | 第59-60页 |
| 3 结果 | 第60-62页 |
| 3.1 agomir-10b对裸鼠皮下成瘤的影响 | 第60-62页 |
| 4 讨论 | 第62-63页 |
| 第四部分 MIR-10B与CSMD1靶向关系的研究 | 第63-83页 |
| 1 材料 | 第63-65页 |
| 1.1 细胞系 | 第63页 |
| 1.2 载体 | 第63-64页 |
| 1.3 主要试剂 | 第64页 |
| 1.4 主要仪器 | 第64-65页 |
| 2 方法 | 第65-75页 |
| 2.1 3’UTR载体构建实验 | 第65-71页 |
| 2.2 双荧光素酶报告实验 | 第71-72页 |
| 2.3 应用qRT-PCR技术检测CSMD1 mRNA水平 | 第72-73页 |
| 2.4 细胞免疫组化 | 第73-74页 |
| 2.5 组织免疫组织化学染色 | 第74页 |
| 2.6 统计学方法 | 第74-75页 |
| 3 结果 | 第75-82页 |
| 3.1 野生型和突变型载体构建成功 | 第75-79页 |
| 3.1.1 PCR扩增目的基因CSMD13’UTR片段及5个菌落PCR鉴定结果 | 第75-79页 |
| 3.2 双荧光素酶报告实验结果 | 第79页 |
| 3.3 q RT-PCR检测miR-10bmimic和inhibitor转然后CSMD1表达变化 | 第79-80页 |
| 3.4 细胞免疫组化检测CSMD1表达变化 | 第80-81页 |
| 3.5 组织免疫组化检测CSMD1表达变化 | 第81-82页 |
| 4 讨论 | 第82-83页 |
| 第五部分 CSMD1在肝癌细胞系和HCC中功能的初步探索 | 第83-92页 |
| 1 材料 | 第84-85页 |
| 1.1 细胞系 | 第84页 |
| 1.2 组织样本 | 第84页 |
| 1.3 主要试剂 | 第84页 |
| 1.4 主要仪器 | 第84-85页 |
| 2 方法 | 第85-86页 |
| 2.1 细胞转染 | 第85-86页 |
| 2.2 q RT-PCR | 第86页 |
| 2.3 细胞免疫组织化学 | 第86页 |
| 2.4 MTT实验 | 第86页 |
| 2.5 Transwell实验 | 第86页 |
| 2.6 免疫组织化学 | 第86页 |
| 2.7 统计学方法 | 第86页 |
| 3 结果 | 第86-90页 |
| 3.0 siRNA和NC转染后CSMD1mRNA表达变化 | 第86-87页 |
| 3.1 siRNA和NC转染后CSMD1蛋白表达变化 | 第87页 |
| 3.2 MTT实验对HepG2细胞增殖能力的影响 | 第87-88页 |
| 3.3 CSMD1 siRNA对HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响 | 第88-89页 |
| 3.4 CSMD1在HCC中免疫组化结果 | 第89-90页 |
| 4 讨论 | 第90-92页 |
| 小结 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-109页 |
| 附录 | 第109-111页 |
| 个人简历和研究成果 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
