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Jnk2通过smARF的降解来调控压力诱导的线粒体自噬及组织损伤

摘要第4-5页
Abstract第5页
1 研究背景第8-13页
    1.1 线粒体自噬第8-9页
        1.1.1 细胞自噬和线粒体自噬第8-9页
        1.1.2 线粒体自噬的机制第9页
    1.2 JNK信号通路第9-10页
    1.3 smARF和泛素蛋白酶体途径第10-11页
        1.3.1 smARF第10-11页
        1.3.2 泛素蛋白酶体途径第11页
    1.4 研究目的和意义第11-13页
2 实验材料第13-15页
    2.1 细胞系第13页
    2.2 质粒和细菌第13页
    2.3 siRNA的合成和序列第13-14页
    2.4 实验试剂第14页
    2.5 抗体信息第14页
    2.6 小鼠第14-15页
3 实验方法第15-29页
    3.1 质粒和siRNA的转染(6 孔板)第15页
    3.2 Western blot第15-17页
        3.2.1 细胞中的蛋白样品 (以六孔板为例)第15-16页
        3.2.2 组织中的蛋白样品第16页
        3.2.3 制胶和电泳第16页
        3.2.4 转膜和封闭第16-17页
        3.2.5 抗体孵育和显影第17页
    3.3 免疫共沉淀CO-IP第17-19页
        3.3.1 铺板第17页
        3.3.2 准备beads第17-18页
        3.3.3 样品抗体共孵育第18页
        3.3.4 CO-IP样品的制备第18页
        3.3.5 蛋白检测第18-19页
    3.4 泛素化实验第19页
    3.5 细胞质和细胞核的抽提第19-20页
        3.5.1 样品的制备第19-20页
        3.5.2 细胞质与细胞核的抽提第20页
    3.6 线粒体/细胞质的分离抽提第20-22页
        3.6.1 实验准备第21页
        3.6.2 细胞抽提第21-22页
    3.7 转化第22页
    3.8 质粒DNA提取第22-26页
        3.8.1 少量质粒DNA的抽提第22-23页
        3.8.2 大量质粒DNA的提取第23-26页
    3.9 线粒体活性氧(ROS)的测量第26页
    3.10 荧光显微镜(Fluorescence microscopy)第26-27页
    3.11 体内实验第27页
    3.12 稳定细胞系的构建第27-29页
4 结果第29-44页
    4.1 JNK2 对压力诱导的线粒体自噬是必要的第29-31页
    4.2 JNK2 能不依赖于PINK1/Parkin途径正调节线粒体自噬第31-33页
    4.3 JNK2 的缺失能稳定smARF蛋白第33-35页
    4.4 JNK2 能促进smARF蛋白的泛素化和降解第35-38页
    4.5 JNK2 能减缓缺氧诱导的组织损伤第38-41页
    补充数据第41-44页
5 讨论第44-46页
6 结论第46-47页
参考文献第47-51页
攻读学位期间的研究成果第51-52页
致谢第52-53页

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