| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 研究背景 | 第8-13页 |
| 1.1 线粒体自噬 | 第8-9页 |
| 1.1.1 细胞自噬和线粒体自噬 | 第8-9页 |
| 1.1.2 线粒体自噬的机制 | 第9页 |
| 1.2 JNK信号通路 | 第9-10页 |
| 1.3 smARF和泛素蛋白酶体途径 | 第10-11页 |
| 1.3.1 smARF | 第10-11页 |
| 1.3.2 泛素蛋白酶体途径 | 第11页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第11-13页 |
| 2 实验材料 | 第13-15页 |
| 2.1 细胞系 | 第13页 |
| 2.2 质粒和细菌 | 第13页 |
| 2.3 siRNA的合成和序列 | 第13-14页 |
| 2.4 实验试剂 | 第14页 |
| 2.5 抗体信息 | 第14页 |
| 2.6 小鼠 | 第14-15页 |
| 3 实验方法 | 第15-29页 |
| 3.1 质粒和siRNA的转染(6 孔板) | 第15页 |
| 3.2 Western blot | 第15-17页 |
| 3.2.1 细胞中的蛋白样品 (以六孔板为例) | 第15-16页 |
| 3.2.2 组织中的蛋白样品 | 第16页 |
| 3.2.3 制胶和电泳 | 第16页 |
| 3.2.4 转膜和封闭 | 第16-17页 |
| 3.2.5 抗体孵育和显影 | 第17页 |
| 3.3 免疫共沉淀CO-IP | 第17-19页 |
| 3.3.1 铺板 | 第17页 |
| 3.3.2 准备beads | 第17-18页 |
| 3.3.3 样品抗体共孵育 | 第18页 |
| 3.3.4 CO-IP样品的制备 | 第18页 |
| 3.3.5 蛋白检测 | 第18-19页 |
| 3.4 泛素化实验 | 第19页 |
| 3.5 细胞质和细胞核的抽提 | 第19-20页 |
| 3.5.1 样品的制备 | 第19-20页 |
| 3.5.2 细胞质与细胞核的抽提 | 第20页 |
| 3.6 线粒体/细胞质的分离抽提 | 第20-22页 |
| 3.6.1 实验准备 | 第21页 |
| 3.6.2 细胞抽提 | 第21-22页 |
| 3.7 转化 | 第22页 |
| 3.8 质粒DNA提取 | 第22-26页 |
| 3.8.1 少量质粒DNA的抽提 | 第22-23页 |
| 3.8.2 大量质粒DNA的提取 | 第23-26页 |
| 3.9 线粒体活性氧(ROS)的测量 | 第26页 |
| 3.10 荧光显微镜(Fluorescence microscopy) | 第26-27页 |
| 3.11 体内实验 | 第27页 |
| 3.12 稳定细胞系的构建 | 第27-29页 |
| 4 结果 | 第29-44页 |
| 4.1 JNK2 对压力诱导的线粒体自噬是必要的 | 第29-31页 |
| 4.2 JNK2 能不依赖于PINK1/Parkin途径正调节线粒体自噬 | 第31-33页 |
| 4.3 JNK2 的缺失能稳定smARF蛋白 | 第33-35页 |
| 4.4 JNK2 能促进smARF蛋白的泛素化和降解 | 第35-38页 |
| 4.5 JNK2 能减缓缺氧诱导的组织损伤 | 第38-41页 |
| 补充数据 | 第41-44页 |
| 5 讨论 | 第44-46页 |
| 6 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |