川芎α-淀粉酶/枯草杆菌蛋白酶抑制剂基因（LASI）的克隆、表达与分析
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第1章 绪论 | 第14-22页 |
| 1.1 川芎简介 | 第14-15页 |
| 1.2 川芎的药理作用 | 第15-17页 |
| 1.2.1 对心脑血管的作用 | 第15页 |
| 1.2.2 对神经系统的作用 | 第15-16页 |
| 1.2.3 对呼吸系统的作用 | 第16页 |
| 1.2.4 对泌尿系统的作用 | 第16页 |
| 1.2.5 其他作用 | 第16-17页 |
| 1.3 A-淀粉酶抑制剂 | 第17-19页 |
| 1.3.1 非蛋白质类 | 第17页 |
| 1.3.2 多肽类 | 第17页 |
| 1.3.3 Lectin type | 第17页 |
| 1.3.4 Knottin type | 第17-18页 |
| 1.3.5 Cereal type | 第18页 |
| 1.3.6 Kuntize type | 第18页 |
| 1.3.7 γ-Purothionin type | 第18页 |
| 1.3.8 Thaumatin type | 第18-19页 |
| 1.4 A-淀粉酶抑制剂的功能和应用 | 第19-20页 |
| 1.4.1 健康与疾病预防方面 | 第19页 |
| 1.4.2 防治虫害方面 | 第19页 |
| 1.4.3 对抗非生物胁迫方面 | 第19-20页 |
| 1.5 课题的研究内容、意义和技术路线 | 第20-22页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第20页 |
| 1.5.2 本研究的意义 | 第20-21页 |
| 1.5.3 本课题的技术路线 | 第21-22页 |
| 第2章 川芎LASI基因的克隆及生物信息学分析 | 第22-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株与载体 | 第22页 |
| 2.1.3 其他试剂 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 RNA的提取及cDNA的合成 | 第23页 |
| 2.2.2 3'端RACE | 第23-25页 |
| 2.2.3 5'端RACE | 第25-26页 |
| 2.2.4 LASI的全长CDS克隆 | 第26-27页 |
| 2.3 生物信息学分析 | 第27页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第27-42页 |
| 2.4.1 RNA提取 | 第27-28页 |
| 2.4.2 3'端RACE和5'端RACE | 第28页 |
| 2.4.3 LASI全长CDS克隆 | 第28-30页 |
| 2.4.4 理化性质分析 | 第30-31页 |
| 2.4.5 亲/疏水性分析 | 第31-32页 |
| 2.4.6 跨膜结构域分析 | 第32页 |
| 2.4.7 信号肤分析 | 第32-33页 |
| 2.4.8 亚细胞定位预测 | 第33-34页 |
| 2.4.9 氨基酸序列比对分析 | 第34-35页 |
| 2.4.10 分子进化树分析 | 第35-36页 |
| 2.4.11 密码子偏好性分析 | 第36-38页 |
| 2.4.12 二级结构预测 | 第38-39页 |
| 2.4.13 功能结构域分析 | 第39页 |
| 2.4.14 三级结构预测 | 第39-40页 |
| 2.4.15 LASI初始模型的优化 | 第40-42页 |
| 2.5 本章小结 | 第42-43页 |
| 第3章 LASI的原核表达与纯化 | 第43-55页 |
| 3.1 实验材料 | 第43页 |
| 3.1.1 菌种与质粒 | 第43页 |
| 3.1.2 试剂及材料 | 第43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-47页 |
| 3.2.1 LASI基因片段的制备 | 第43-44页 |
| 3.2.2 原核表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 3.2.3 LASI的诱导表达 | 第45-46页 |
| 3.2.4 原核表达条件的优化 | 第46页 |
| 3.2.5 可溶性检测 | 第46-47页 |
| 3.2.6 LASI蛋白的纯化 | 第47页 |
| 3.2.7 纯化蛋白的鉴定 | 第47页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第47-53页 |
| 3.3.1 原核表达载体的构建 | 第47-48页 |
| 3.3.2 LASI的诱导表达 | 第48-49页 |
| 3.3.3 原核表达条件的优化 | 第49-51页 |
| 3.3.4 可溶性检测 | 第51-52页 |
| 3.3.5 LASI蛋白的纯化与鉴定 | 第52-53页 |
| 3.4 本章小结 | 第53-55页 |
| 第4章 LASI的活性检测 | 第55-62页 |
| 4.1 实验材料 | 第55页 |
| 4.1.1 昆虫材料 | 第55页 |
| 4.1.2 其他试剂 | 第55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-57页 |
| 4.2.1 LASI纯化蛋白浓度的测定 | 第55页 |
| 4.2.2 昆虫淀粉酶的提取 | 第55-56页 |
| 4.2.3 α-淀粉酶抑制活性检测 | 第56页 |
| 4.2.4 枯草杆菌蛋白酶抑制活性检测 | 第56-57页 |
| 4.2.5 胰蛋白酶抑制活性检测 | 第57页 |
| 4.2.6 胰凝乳蛋白酶抑制活性检测 | 第57页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第57-61页 |
| 4.3.1 LASI纯化蛋白的浓度 | 第58页 |
| 4.3.2 α-淀粉酶抑制活性 | 第58-60页 |
| 4.3.3 蛋白酶抑制活性 | 第60-61页 |
| 4.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 第5章 LASI的表达模式分析 | 第62-69页 |
| 5.1 实验材料 | 第62页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第62页 |
| 5.1.2 其他试剂 | 第62页 |
| 5.2 实验方法 | 第62-64页 |
| 5.2.1 川芎植物胁迫处理 | 第62页 |
| 5.2.2 RNA的提取与cDNA的合成 | 第62-63页 |
| 5.2.3 特异引物的检测 | 第63-64页 |
| 5.2.4 RT-qPCR扩增 | 第64页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第64-68页 |
| 5.3.1 胁迫组织RNA提取 | 第64-65页 |
| 5.3.2 特异性引物检测 | 第65页 |
| 5.3.3 川芎LASI基因的表达模式分析 | 第65-68页 |
| 5.4 本章小结 | 第68-69页 |
| 结论 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第79页 |
