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球孢白僵菌硫醇/二硫化物氧化还原酶系和两个内吞标志位点蛋白的功能解析

致谢第6-14页
摘要第14-18页
1 真菌抗氧化酶系及内吞标志位点蛋白的研究现状第18-31页
    1.1 生防真菌的胁迫应答机制第18-21页
        1.1.1 抗氧化第18-19页
        1.1.2 耐高温胁迫第19页
        1.1.3 抗紫外辐射第19-20页
        1.1.4 耐化学农药第20-21页
    1.2 谷氧还蛋白与谷胱甘肽还原酶的功能第21-23页
    1.3 硫氧还蛋白与硫氧还蛋白还原酶的功能第23-27页
        1.3.1 硫氧还蛋白第24-25页
        1.3.2 硫氧还蛋白还原酶第25-27页
    1.4 内吞标志位点蛋白PIL1和LsP1的结构与功能第27-29页
    1.5 展望第29-31页
2 球孢白僵菌谷氧还蛋白及谷胱甘肽还原酶的功能解析第31-59页
    2.1 材料第33-34页
        2.1.1 菌株及培养条件第33页
        2.1.2 试剂及试剂盒第33-34页
    2.2 方法第34-45页
        2.2.1 真菌核酸提取第34-35页
        2.2.2 球孢白僵菌Grx及Glr的鉴定及分类第35-36页
        2.2.3 Grx/Glr单基因敲除/回补菌株的构建与鉴定第36-38页
        2.2.4 grx和glr的转录水平分析第38-39页
        2.2.5 SOD总酶活、CAT总酶活及GSH-POD总酶活的测定第39-41页
        2.2.6 胞内谷胱甘肽含量的测定第41-42页
        2.2.7 胞内ROS含量的测定第42页
        2.2.8 关键铁离子转运蛋白基因的转录水平测定第42-43页
        2.2.9 生物累积量、产孢量及萌发速率测定第43页
        2.2.10 化学及环境胁迫敏感性的测定第43-44页
        2.2.11 分生孢子毒力的生物测定第44-45页
        2.2.12 数据处理与分析第45页
    2.3 结果与分析第45-55页
        2.3.1 球孢白僵菌GRX/GLR家族的结构特征与分类第45-47页
        2.3.2 各grx或glr单基因缺失上调伙伴基因的转录表达第47-50页
        2.3.3 各grx或glr单基因缺失对胞内GSH/GSSG比率及ROS水平的影响第50-51页
        2.3.4 各grx或glr单基因缺失对胞内SOD、CAT及GSH-POD总酶活的影响第51-52页
        2.3.5 各grx或glr缺失对Fe~(3+)抗性及其转运蛋白转录表达的影响第52-53页
        2.3.6 各grx或glr缺失对胁迫应答的影响第53页
        2.3.7 各grx或glr缺失对生防潜能相关性状的影响第53-55页
    2.4 讨论第55-59页
3 球孢白僵菌硫氧还蛋白酶的功能解析第59-78页
    3.1 材料第60页
        3.1.1 菌株和培养条件第60页
        3.1.2 试剂和试剂盒第60页
    3.2 方法第60-65页
        3.2.1 真菌核酸的提取第60页
        3.2.2 六个Trx同源蛋白的序列分析第60-61页
        3.2.3 各Trx基因的敲除与回补菌株构建与鉴定第61页
        3.2.4 各trx的转录分析第61-62页
        3.2.5 各Trx的亚细胞定位第62-63页
        3.2.6 胞内SOD总酶活、谷胱甘肽含量及Trx总酶活的测定第63-64页
        3.2.7 胁迫敏感性的测定第64-65页
        3.2.8 分生孢子产量及萌发速率测定第65页
        3.2.9 分生孢子毒力的生物测定第65页
        3.2.10 数据处理与分析第65页
    3.3 结果与分析第65-75页
        3.3.1 球孢白僵菌TRX家族的结构特征与分类第65-67页
        3.3.2 球孢白僵菌各Trx的亚细胞定位第67-69页
        3.3.3 各trx的单基因缺失对伙伴基因转录表达的影响第69页
        3.3.4 各trx的缺失对胞内SOD及Trx总酶活的影响第69-72页
        3.3.5 各trx的缺失对胞内谷胱甘肽状态的影响第72-73页
        3.3.6 各trx的缺失对生防潜能的影响第73-75页
    3.4 讨论第75-78页
4 球孢白僵菌硫氧还蛋白酶还原酶的功能解析第78-100页
    4.1 材料第79页
        4.1.1 菌株和培养条件第79页
        4.1.2 试剂和试剂盒第79页
    4.2 方法第79-84页
        4.2.1 真菌核酸的提取第79页
        4.2.2 球孢白僵菌Trr的基因克隆及序列分析第79-80页
        4.2.3 Trr1/2的亚细胞定位第80页
        4.2.4 trr1和trr2突变株的构建与鉴定第80-81页
        4.2.5 trr转录动态及Atrr/trx转录变化的分析第81-82页
        4.2.6 SOD、CAT、POD及Trx总酶活的测定第82-83页
        4.2.7 胞内谷胱甘肽含量的测定第83页
        4.2.8 半胱氨酸营养缺陷的检测第83页
        4.2.9 分生孢子产量及其特征的分析第83页
        4.2.10 抗逆力测定第83-84页
        4.2.11 分生孢子毒力的生物测定第84页
        4.2.12 数据处理与分析第84页
    4.3 结果与分析第84-95页
        4.3.1 球孢白僵菌TRR的基本特征第84-87页
        4.3.2 trr缺失及其缺失背景下超表达trx_i对Trx总酶活的影响第87-89页
        4.3.3 突变株Trx、SOD、CAT及POD总酶活的变化第89-90页
        4.3.4 突变株GSH/GSSG比值的变化第90-91页
        4.3.5 突变株半胱氨酸营养缺陷的变化第91-92页
        4.3.6 突变株对氧化胁迫的敏感性变化第92-93页
        4.3.7 突变株生防潜能的变化第93-95页
    4.4 讨论第95-100页
5 球孢白僵菌内吞标志位点蛋白PIL1及LSP1的功能解析第100-117页
    5.1 材料第101页
        5.1.1 菌株和培养条件第101页
        5.1.2 试剂和试剂盒第101页
    5.2 方法第101-106页
        5.2.1 真菌核酸的提取第101页
        5.2.2 球孢白僵菌Pil1及Lsp1的序列分析第101-102页
        5.2.3 球孢白僵菌pil1及lsp1缺失突变株的构建与鉴定第102-103页
        5.2.4 Pil1和Lsp1的亚细胞定位第103页
        5.2.5 细胞自噬相关基因转录水平的测定第103-104页
        5.2.6 菌丝细胞自噬体的检测第104-105页
        5.2.7 碳源利用率测定第105页
        5.2.8 胁迫敏感性的测定第105-106页
        5.2.9 分生孢子产量及萌发速率的检测第106页
        5.2.10 分生孢子毒力的生物测定第106页
        5.2.11 数据处理与分析第106页
    5.3 结果与分析第106-114页
        5.3.1 球孢白僵菌Pil1和Lsp1的结构特征第106页
        5.3.2 球孢白僵菌Pil1和Lsp1的亚细胞定位第106-108页
        5.3.3 pil1/lsp1缺失对胞壁结构、多胁迫应答及碳源利用的影响第108-111页
        5.3.4 pil1/lsp1缺失导致细胞自噬异常第111-113页
        5.3.5 pil1和lsp1缺失对球孢白僵菌生防潜能的影响第113-114页
    5.4 讨论第114-117页
6 结语第117-119页
参考文献第119-134页
SUMMARY第134-137页
附录:攻读博士学位期间的主要成果第138页

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