| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词和术语表 | 第9-13页 |
| 第一章 综述 | 第13-29页 |
| 1.1 达托霉素的结构与作用机制 | 第14-16页 |
| 1.1.1 达托霉素的结构 | 第14-15页 |
| 1.1.2 达托霉素的作用机制 | 第15-16页 |
| 1.2 达托霉素的生物合成与提高产量策略 | 第16-20页 |
| 1.2.1 达托霉素的生物合成 | 第16-18页 |
| 1.2.2 提高达托霉素产量的策略 | 第18-20页 |
| 1.3 TetR家族调控因子研究进展 | 第20-28页 |
| 1.3.1 TetR家族调控因子的结构与功能 | 第21-25页 |
| 1.3.2 TetR调控链霉菌抗生素生物合成研究进展 | 第25-28页 |
| 1.4 本文的研究内容及意义 | 第28-29页 |
| 1.4.1 本文的研究内容 | 第28页 |
| 1.4.2 本文的研究意义 | 第28-29页 |
| 第二章 达托霉素生物合成调控因子DepR1的筛选与调控机制研究 | 第29-57页 |
| 2.1 引言 | 第29-30页 |
| 2.2 实验材料 | 第30-37页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第30-31页 |
| 2.2.2 引物列表 | 第31-32页 |
| 2.2.3 主要仪器与设备 | 第32-33页 |
| 2.2.4 培养基及培养条件 | 第33-34页 |
| 2.2.5 常见试剂 | 第34-37页 |
| 2.3 实验方法 | 第37-48页 |
| 2.3.1 分子克隆PCR体系与程序 | 第37-38页 |
| 2.3.2 胶回收、质粒抽提、酶切与DNA片段的连接 | 第38页 |
| 2.3.3 感受态细胞的制备与转化 | 第38-39页 |
| 2.3.4 质粒的构建 | 第39页 |
| 2.3.5 链霉菌的培养与总蛋白的提取 | 第39-40页 |
| 2.3.6 DNA亲和纯化技术 | 第40-41页 |
| 2.3.7 大肠杆菌中重组蛋白的诱导与纯化 | 第41-42页 |
| 2.3.8 SDS-PAGE与蛋白浓度检测 | 第42页 |
| 2.3.9 凝胶阻滞实验(EMSA) | 第42-43页 |
| 2.3.10 DNase I footprinting | 第43-44页 |
| 2.3.11 Western Blot | 第44-45页 |
| 2.3.12 depR1的敲除,回补与高表达菌株的构建 | 第45-46页 |
| 2.3.13 链霉菌的发酵培养 | 第46页 |
| 2.3.14 链霉菌的接合转移 | 第46-47页 |
| 2.3.15 链霉菌基因组DNA的抽提 | 第47-48页 |
| 2.3.16 达托霉素产量HPLC检测 | 第48页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第48-56页 |
| 2.4.1 DNA亲和纯化技术流程 | 第48-49页 |
| 2.4.2 depR1的克隆,表达与纯化 | 第49-50页 |
| 2.4.3 DepR1结合在达托霉素生物合成基因簇起始启动子区 | 第50-52页 |
| 2.4.4 DepR1正调控dptEp的活性 | 第52页 |
| 2.4.5 DepR1正调控达托霉素的生物合成 | 第52-55页 |
| 2.4.6 DepR1对玫瑰孢链霉菌形态发育的调控 | 第55-56页 |
| 2.5 本章小结 | 第56-57页 |
| 第三章 depR1的自调控机制研究 | 第57-66页 |
| 3.1 引言 | 第57-58页 |
| 3.2 实验材料 | 第58-62页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第58-59页 |
| 3.2.2 相关引物 | 第59-60页 |
| 3.2.3 主要仪器与设备 | 第60-61页 |
| 3.2.4 培养基及培养条件 | 第61-62页 |
| 3.2.5 常见试剂 | 第62页 |
| 3.3 实验方法 | 第62页 |
| 3.3.1 质粒的构建 | 第62页 |
| 3.3.2 本章使用的其他方法 | 第62页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第62-65页 |
| 3.4.1 DepR1结合在自身编码基因的起始启动子区 | 第62-63页 |
| 3.4.2 DNase I footprinting实验分析DepR1结合自身编码基因启动子区的序列 | 第63-64页 |
| 3.4.3 DepR1正调控自身的表达 | 第64-65页 |
| 3.4.4 DepR1在玫瑰孢链霉菌SW0702中调控模式总结 | 第65页 |
| 3.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 第四章 结论与展望 | 第66-68页 |
| 4.1 本文研究成果 | 第66页 |
| 4.2 展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 攻读硕士学位期间的主要研究成果 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
