| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| 英文摘要 | 第8-9页 |
| 英文缩略语表 | 第10-16页 |
| 第一部分 产KPC肺炎克雷伯菌替加环素敏感性分析以及RND型外排泵在替加环素耐药中的作用研究 | 第16-60页 |
| 引言 | 第16-19页 |
| 1 材料与方法 | 第19-36页 |
| 1.1 材料 | 第19-23页 |
| 1.1.1 菌株来源及菌种鉴定 | 第19页 |
| 1.1.2 试剂和仪器 | 第19-21页 |
| 1.1.3 试剂配制方法 | 第21-23页 |
| 1.2 研究方法 | 第23-36页 |
| 1.2.1 抗菌药物敏感性测定 | 第23-24页 |
| 1.2.2 外排泵抑制剂抑制表型检测 | 第24-26页 |
| 1.2.3 根据替加环素MIC梯度选取菌株 | 第26页 |
| 1.2.4 脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行菌株同源性分析 | 第26-27页 |
| 1.2.5 荧光定量PCR检测RND型外排泵及其调控基因的表达 | 第27-30页 |
| 1.2.6 分析基因表达量与替加环素MIC之间的关系 | 第30-31页 |
| 1.2.7 acrR、ramR、marR、soxR和lon基因的突变检测 | 第31-32页 |
| 1.2.8 含野生型ramR质粒的构建及回补实验 | 第32-36页 |
| 2 结果 | 第36-51页 |
| 2.1 产KPC肺炎克雷伯菌替加环素耐药率及MIC分布 | 第36-38页 |
| 2.2 外排泵抑制剂表型检测结果 | 第38-40页 |
| 2.3 根据替加环素MIC梯度选取菌株和分组 | 第40页 |
| 2.4 脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行菌株同源性分析 | 第40-43页 |
| 2.5 RND型外排泵及其调节基因表达检测结果 | 第43-45页 |
| 2.6 统计分析基因表达与替加环素MIC之间的关系 | 第45-48页 |
| 2.7 acrR、ramR、marR、soxR和lon基因的突变分析 | 第48-50页 |
| 2.8 ramR基因突变进而引起RND型外排泵AcrAB的高表达是导致肺炎克雷伯菌临床菌株替加环素耐药的主要机制之一 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 4 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 第二部分 大肠埃希菌替加环素耐药新机制研究 | 第60-106页 |
| 引言 | 第60-62页 |
| 1 材料与方法 | 第62-86页 |
| 1.1 材料 | 第62-67页 |
| 1.1.1 菌株和质粒 | 第62-64页 |
| 1.1.2 试剂和仪器 | 第64-66页 |
| 1.1.3 试剂配制方法 | 第66-67页 |
| 1.2 研究方法 | 第67-86页 |
| 1.2.1 抗菌药物敏感性测定 | 第67-68页 |
| 1.2.2 菌株ATCC25922外排泵基因acrAB的敲除 | 第68-74页 |
| 1.2.3 替加环素体外诱导耐药实验 | 第74-75页 |
| 1.2.4 耐药菌株生长曲线及适应性代价的测定 | 第75页 |
| 1.2.5 耐药菌株和亲本菌株全基因组测序 | 第75-76页 |
| 1.2.6 生物信息学分析 | 第76页 |
| 1.2.7 潜在突变位点的验证 | 第76-79页 |
| 1.2.8 基因敲除和回补进行突变基因功能验证 | 第79-82页 |
| 1.2.9 荧光定量PCR检测菌株25922-TGC8中RND型外排泵AcrAB及其调控基因的表达 | 第82-85页 |
| 1.2.10 mlaA、marR和rpsJ基因突变对替加环素耐药的累加效应分析 | 第85-86页 |
| 2 结果 | 第86-97页 |
| 2.1 替加环素耐药菌株的获得 | 第86-88页 |
| 2.2 菌株25922-TGC8和25922△acrAB-TGC8的适应性代价 | 第88页 |
| 2.3 全基因组分析结果 | 第88-93页 |
| 2.4 mlaA基因的突变是引起菌株对替加环素敏感性降低的原因之一 | 第93-95页 |
| 2.5 菌株25922-TGC8外排泵AcrAB及其调控基因表达检测结果 | 第95页 |
| 2.6 mlaA、marR和rpsJ基因突变对替加环素耐药的累加效应分析 | 第95-97页 |
| 3 讨论 | 第97-99页 |
| 4 结论 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-106页 |
| 文献综述 肠杆菌科细菌替加环素耐药机制研究进展 | 第106-125页 |
| 参考文献 | 第115-125页 |
| 作者简介及攻读博士学位期间所取得的科研成果 | 第125-126页 |
