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病毒巨噬细胞炎症蛋白Ⅱ调控抗HIV-1基因APOBEC3G表达机制的初步探讨

致谢第1-6页
摘要第6-8页
Abstract第8-10页
缩略词表第10-14页
引言第14-16页
第一章 综述第16-23页
   ·病毒巨噬细胞炎症蛋白-Ⅱ第16-17页
   ·趋化因子受体第17-19页
   ·载脂蛋白 B m RNA 编辑酶催化样蛋白 3G(APOBEC3G)第19-21页
   ·v MIP-Ⅱ 可上调 APOBEC3G 表达第21-22页
   ·小结与展望第22-23页
第二章 材料第23-30页
   ·菌株、质粒和细胞株第23页
   ·主要试剂第23-25页
   ·主要仪器设备第25-26页
   ·常用试剂配制第26-28页
   ·PCR引物第28-29页
   ·常用引物的稀释第29-30页
第三章 方法第30-44页
   ·细胞的复苏、培养、传代、冻存和计数第30-33页
   ·转染第33-36页
   ·干扰素和抑制剂处理第36-37页
   ·western blot(蛋白质免疫印迹试验)第37-39页
   ·RNA的抽提第39-40页
   ·逆转录PCR第40页
   ·PCR验证待筛选目的基因是否表达第40-41页
   ·实时定量PCR第41页
   ·双荧光素酶报告基因检测系统第41-44页
第四章 结果第44-64页
   ·v MIP-Ⅱ 蛋白在 293T 细胞中的表达第44-46页
     ·pEGFP-N3-K4转染第44-45页
     ·PCR鉴定目的基因在细胞内的表达第45页
     ·Western Blot检测K4基因在 293T细胞中是否表达vMIP-II蛋白第45-46页
   ·v MIP-Ⅱ上调APOBEC3G表达第46-47页
     ·qRT-PCR检测vMIP-II对APOBEC3G m RNA表达水平影响第46-47页
     ·Wertern Blot检测vMIP-II对APOBEC3G蛋白表达水平影响第47页
   ·v MIP-Ⅱ与IFN-a上调细胞内APOBEC3G表达的比较分析第47-50页
   ·v MIP-Ⅱ对细胞膜表面趋化因子受体CCR3、CCR5、CCR6表达水平影响第50-51页
     ·q RT-PCR检测vMIP-Ⅱ对趋化因子受体CCR3、CCR5、CCR6 mRNA表达水平变化第50页
     ·Werstern blot检测检测vMIP-Ⅱ相关趋化因子受体CCR3、CCR5、CCR6蛋白表达水平变化第50-51页
   ·AG490(JAK/STAT信号通路抑制剂)和U0126(ERK信号通路抑制剂)对APOBEC3G表达影响第51-53页
     ·qRT-PCR检测AG490和U0126对APOBEC3G表达的抑制作用第51-53页
     ·Western Blot检测AG490和U0126对APOBEC3G表达的抑制作用第53页
   ·AG490和U0126对趋化因子受体CCR3、CCR5、CCR6以及JAK/STAT信号通路和ERK信号通路下游关键分子因子蛋白水平影响第53-56页
     ·AG490和U0126对趋化因子受体CCR3、CCR5、CCR6表达影响达第53-54页
     ·AG490和U0126对JAK/STAT信号通路和ERK信号通路下游关键分子蛋白水平影响第54-56页
   ·v MIP-Ⅱ调控APOBEC3G转录活性的关键启动子作用区域第56-64页
     ·APOBEC3G基因上游转录调控区域的生物信息学分析第56-57页
     ·APOBEC3G启动子荧光素酶报告基因载体构建和扩增第57-60页
     ·双荧光素酶报告基因系统检测APOBEC3G启动子上vMIP-Ⅱ上调APOBEC3G表达的主要作用区域第60-64页
第五章 讨论第64-69页
   ·K4基因的选取第64页
   ·抗HIV免疫抑制因子APOBEC3G的选取第64页
   ·克隆载体的选取第64-65页
   ·抑制剂AG490和U0126的选取第65-66页
   ·vMIP-Ⅱ能够上调APOBEC3G的表达第66页
   ·JAK/STAT信号通路抑制剂AG490和ERK信号通路抑制剂U0126对vMIP-Ⅱ调控细胞内APOBEC3G表达的影响第66-67页
   ·vMIP-Ⅱ上调APOBEC3G表达的关键启动子调控区域第67-69页
结论第69-70页
参考文献第70-75页
个人简介第75页

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