致谢 | 第1-6页 |
摘要 | 第6-8页 |
Abstract | 第8-10页 |
缩略词表 | 第10-14页 |
引言 | 第14-16页 |
第一章 综述 | 第16-23页 |
·病毒巨噬细胞炎症蛋白-Ⅱ | 第16-17页 |
·趋化因子受体 | 第17-19页 |
·载脂蛋白 B m RNA 编辑酶催化样蛋白 3G(APOBEC3G) | 第19-21页 |
·v MIP-Ⅱ 可上调 APOBEC3G 表达 | 第21-22页 |
·小结与展望 | 第22-23页 |
第二章 材料 | 第23-30页 |
·菌株、质粒和细胞株 | 第23页 |
·主要试剂 | 第23-25页 |
·主要仪器设备 | 第25-26页 |
·常用试剂配制 | 第26-28页 |
·PCR引物 | 第28-29页 |
·常用引物的稀释 | 第29-30页 |
第三章 方法 | 第30-44页 |
·细胞的复苏、培养、传代、冻存和计数 | 第30-33页 |
·转染 | 第33-36页 |
·干扰素和抑制剂处理 | 第36-37页 |
·western blot(蛋白质免疫印迹试验) | 第37-39页 |
·RNA的抽提 | 第39-40页 |
·逆转录PCR | 第40页 |
·PCR验证待筛选目的基因是否表达 | 第40-41页 |
·实时定量PCR | 第41页 |
·双荧光素酶报告基因检测系统 | 第41-44页 |
第四章 结果 | 第44-64页 |
·v MIP-Ⅱ 蛋白在 293T 细胞中的表达 | 第44-46页 |
·pEGFP-N3-K4转染 | 第44-45页 |
·PCR鉴定目的基因在细胞内的表达 | 第45页 |
·Western Blot检测K4基因在 293T细胞中是否表达vMIP-II蛋白 | 第45-46页 |
·v MIP-Ⅱ上调APOBEC3G表达 | 第46-47页 |
·qRT-PCR检测vMIP-II对APOBEC3G m RNA表达水平影响 | 第46-47页 |
·Wertern Blot检测vMIP-II对APOBEC3G蛋白表达水平影响 | 第47页 |
·v MIP-Ⅱ与IFN-a上调细胞内APOBEC3G表达的比较分析 | 第47-50页 |
·v MIP-Ⅱ对细胞膜表面趋化因子受体CCR3、CCR5、CCR6表达水平影响 | 第50-51页 |
·q RT-PCR检测vMIP-Ⅱ对趋化因子受体CCR3、CCR5、CCR6 mRNA表达水平变化 | 第50页 |
·Werstern blot检测检测vMIP-Ⅱ相关趋化因子受体CCR3、CCR5、CCR6蛋白表达水平变化 | 第50-51页 |
·AG490(JAK/STAT信号通路抑制剂)和U0126(ERK信号通路抑制剂)对APOBEC3G表达影响 | 第51-53页 |
·qRT-PCR检测AG490和U0126对APOBEC3G表达的抑制作用 | 第51-53页 |
·Western Blot检测AG490和U0126对APOBEC3G表达的抑制作用 | 第53页 |
·AG490和U0126对趋化因子受体CCR3、CCR5、CCR6以及JAK/STAT信号通路和ERK信号通路下游关键分子因子蛋白水平影响 | 第53-56页 |
·AG490和U0126对趋化因子受体CCR3、CCR5、CCR6表达影响达 | 第53-54页 |
·AG490和U0126对JAK/STAT信号通路和ERK信号通路下游关键分子蛋白水平影响 | 第54-56页 |
·v MIP-Ⅱ调控APOBEC3G转录活性的关键启动子作用区域 | 第56-64页 |
·APOBEC3G基因上游转录调控区域的生物信息学分析 | 第56-57页 |
·APOBEC3G启动子荧光素酶报告基因载体构建和扩增 | 第57-60页 |
·双荧光素酶报告基因系统检测APOBEC3G启动子上vMIP-Ⅱ上调APOBEC3G表达的主要作用区域 | 第60-64页 |
第五章 讨论 | 第64-69页 |
·K4基因的选取 | 第64页 |
·抗HIV免疫抑制因子APOBEC3G的选取 | 第64页 |
·克隆载体的选取 | 第64-65页 |
·抑制剂AG490和U0126的选取 | 第65-66页 |
·vMIP-Ⅱ能够上调APOBEC3G的表达 | 第66页 |
·JAK/STAT信号通路抑制剂AG490和ERK信号通路抑制剂U0126对vMIP-Ⅱ调控细胞内APOBEC3G表达的影响 | 第66-67页 |
·vMIP-Ⅱ上调APOBEC3G表达的关键启动子调控区域 | 第67-69页 |
结论 | 第69-70页 |
参考文献 | 第70-75页 |
个人简介 | 第75页 |