海藻糖酶（trehalase）基因在中国卤虫滞育解除过程中的作用
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 1 前言 | 第7-10页 |
| ·卤虫的分布及生物学特征 | 第7页 |
| ·卤虫的滞育 | 第7-8页 |
| ·海藻糖酶（Trehalase） | 第8-10页 |
| ·研究的目的及意义 | 第10页 |
| 2 材料与方法 | 第10-26页 |
| ·实验材料 | 第10-14页 |
| ·卤虫的孵化与培养 | 第10页 |
| ·实验试剂 | 第10-13页 |
| ·总RNA的提取相关试剂（天根生化科技有限司） | 第10-11页 |
| ·cDNA合成试剂（大连宝生物公司） | 第11页 |
| ·PCR反应相关试剂（大连宝生物公司） | 第11页 |
| ·核酸电泳相关试剂 | 第11页 |
| ·PCR产物的回收与克隆试剂 | 第11-12页 |
| ·Real-Time PCR相关试剂 | 第12页 |
| ·酶切及表达载体构建相关试剂 | 第12-13页 |
| ·蛋白纯化试剂 | 第13页 |
| ·总蛋白提取试剂 | 第13页 |
| ·仪器设备 | 第13-14页 |
| ·实验方法 | 第14-26页 |
| ·卤虫总RNA的获得 | 第14页 |
| ·合成cDNA | 第14-15页 |
| ·Treahalase基因的扩增 | 第15-16页 |
| ·Trehalase 3’RACE反应 | 第16-18页 |
| ·PCR产物的回收与克隆 | 第18-20页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第18-19页 |
| ·载体的连接与纯化 | 第19页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第19-20页 |
| ·质粒的提取 | 第20页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第20-21页 |
| ·蛋白的原核表达 | 第21-23页 |
| ·构建PET表达载体 | 第21-22页 |
| ·小量诱导培养 | 第22-23页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第23页 |
| ·重组蛋白表达及可溶性检测 | 第23页 |
| ·重组蛋白的大量诱导及纯化 | 第23-26页 |
| ·的生物信息学及生物统计学分析 | 第26页 |
| 3 结果 | 第26-41页 |
| ·卤虫总RNA的提取 | 第26页 |
| ·Treahalase基因序列的获得 | 第26-28页 |
| ·Treahalase基因全长序列 | 第28-30页 |
| ·Trehalase的生物信息学分析 | 第30-33页 |
| ·Trehalase进化树构建 | 第33-34页 |
| ·卤虫Trehalase的表达模式 | 第34-36页 |
| ·卤虫不同发育时期Trehalase的表达量 | 第34-35页 |
| ·卤虫在不同温度条件下Trehalase的表达量 | 第35页 |
| ·卤虫在不同盐度条件下Trehalase的表达量 | 第35-36页 |
| ·Trehalase ORF的扩增 | 第36-37页 |
| ·Trehalase重组蛋白的表达及纯化 | 第37-39页 |
| ·Trehalase重组蛋白的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·Trehalase重组蛋白的可溶性检测 | 第38页 |
| ·Trehalase重组蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| ·蛋白在卤虫不同发育时期的表达 | 第39-40页 |
| ·酶活性检测 | 第40-41页 |
| 4.讨论 | 第41-44页 |
| ·中国卤虫Trehalase基因全长及进化特征 | 第41-42页 |
| ·Trehalase不同发育时期的表达量 | 第42页 |
| ·Trehalase在不同温度、盐度下的表达量 | 第42-43页 |
| ·Trehalase在滞育及滞育解除中的作用 | 第43页 |
| ·Trehalase原核表达重组蛋白与纯化 | 第43页 |
| ·在不同温度下的酶活性 | 第43-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 致谢 | 第49页 |
