| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 主要符号与缩写 | 第12-14页 |
| 第一章 NPSP 同位素探针的合成及其用于正常与癌症细胞内多种小分子生物硫醇的质谱定量分析 | 第14-64页 |
| 摘要 | 第14页 |
| 1 引言 | 第14-29页 |
| ·正常与癌变细胞中多种小分子生物硫醇研究的意义 | 第16-18页 |
| ·细胞的氧化还原状态与疾病的关联 | 第16页 |
| ·生物硫醇在细胞抗氧化系统中的重要作用 | 第16-18页 |
| ·小分子生物硫醇的检测方法 | 第18-26页 |
| ·目前小分子生物硫醇检测方法及其局限性 | 第18页 |
| ·同位素标记质谱定量分析法 | 第18-26页 |
| ·小分子生物硫醇检测存在的困难 | 第26-27页 |
| ·小分子生物硫醇易氧化 | 第26页 |
| ·常用的生物硫醇衍生化试剂存在的不足 | 第26-27页 |
| ·NPSP 探针衍生化生物硫醇中的优势 | 第27页 |
| ·本章的研究内容 | 第27-29页 |
| 2.实验部分 | 第29-36页 |
| ·试剂与仪器 | 第29-30页 |
| ·试剂处理 | 第30页 |
| ·NPSP-d_5的合成 | 第30-32页 |
| ·NPSP-d_5的合成路线 | 第30-31页 |
| ·NPSP-d_5的合成步骤 | 第31-32页 |
| ·生物硫醇的衍生化标记 | 第32-33页 |
| ·细胞培养与预处理 | 第33页 |
| ·细胞悬浮液细胞密度调节 | 第33-34页 |
| ·细胞中生物硫醇的衍生化标记 | 第34页 |
| ·细胞毒性试验(MTT) | 第34-35页 |
| ·Biothiols-NPSP 的稳定性 | 第35页 |
| ·LC/ESI-MS 检测 | 第35-36页 |
| ·色谱条件 | 第35-36页 |
| ·质谱条件 | 第36页 |
| 3 结果与讨论 | 第36-53页 |
| ·NPSP 同位素探针与生物硫醇的反应机理 | 第36-38页 |
| ·NPSP 同位素探针与生物硫醇的反应比例 | 第37页 |
| ·NPSP 同位素探针与生物硫醇的反应时间 | 第37-38页 |
| ·NPSP 同位素探针与生物硫醇的反应 | 第38-42页 |
| ·NPSP 同位素探针避免生物硫醇的氧化 | 第42-45页 |
| ·NPSP 同位素探针对生物硫醇的相对定量 | 第45-47页 |
| ·探针毒性实验 | 第47-48页 |
| ·Biothiols-NPSP 的稳定性 | 第48-49页 |
| ·L02 及 HepG2 中多种小分子生物硫醇的相对定量检测 | 第49-53页 |
| ·LC/ESI-MS 检测多种小分子生物硫醇方法的建立 | 第49-50页 |
| ·细胞中多种小分子生物硫醇的定量分析 | 第50-53页 |
| 4 本章总结 | 第53页 |
| 5 参考文献 | 第53-64页 |
| 第二章 微流控芯片电泳-激光诱导荧光法同时定量检测单细胞内 NO 与 Ca~(2+)的研究 | 第64-94页 |
| 摘要 | 第64页 |
| 1 引言 | 第64-73页 |
| ·NO 与 Ca~(2+)的生理作用及研究的意义 | 第64-67页 |
| ·NO 的生理作用及研究的意义 | 第64-65页 |
| ·Ca~(2+)的生理作用及研究的意义 | 第65-66页 |
| ·NO 与 Ca~(2+)的相互关联 | 第66-67页 |
| ·现有 NO 与 Ca~(2+)检测的方法及不足 | 第67-68页 |
| ·NO 的检测 | 第67页 |
| ·Ca~(2+)的检测 | 第67页 |
| ·NO 与 Ca~(2+)的同时检测 | 第67-68页 |
| ·基于微流控的单细胞组分分析的研究进展 | 第68-73页 |
| ·单细胞分析的重要意义 | 第68页 |
| ·微流控单细胞分析 | 第68-73页 |
| ·本章研究内容 | 第73页 |
| 2 NO 与 Ca~(2+)荧光探针的选择 | 第73-75页 |
| 3 实验部分 | 第75-82页 |
| ·试剂与仪器 | 第75-76页 |
| ·微流控芯片-激光诱导荧光检测系统 | 第76-77页 |
| ·细胞的培养 | 第77-78页 |
| ·样品的制备 | 第78-79页 |
| ·NO 标准液的制备 | 第78页 |
| ·NO 荧光产物 DAF-FMT 标准溶液的制备 | 第78页 |
| ·Ca~(2+)荧光产物 Fluo-3T 标准溶液的制备 | 第78-79页 |
| ·微芯片的预处理及基线稳定性考察 | 第79-80页 |
| ·单细胞的连续操纵 | 第80-81页 |
| ·单细胞内 NO 和 Ca~(2+)的同时定量检测 | 第81-82页 |
| 4 结果与讨论 | 第82-86页 |
| ·探针 DAF-FM DA 和 Fluo-3 AM 的反应机理及荧光光谱表征 | 第82-83页 |
| ·方法的性能 | 第83-86页 |
| ·分离性能 | 第83-84页 |
| ·线性范围、检出限、及重现性 | 第84-86页 |
| ·单细胞内 NO 和 Ca~(2+)的同时定量检测 | 第86页 |
| 5 本章总结 | 第86页 |
| 6 参考文献 | 第86-94页 |
| 附录 谱图 | 第94-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
