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猪瘟野毒株的分离鉴定及与疫苗株的HRM鉴别方法的建立

摘要第1-8页
Abstract第8-9页
缩略词表第9-10页
前言第10-11页
第一章 研究综述第11-19页
 1 猪瘟病毒第11-16页
   ·猪瘟病毒分子生物学特征第11-14页
     ·CSFV 基因组编码的结构蛋白及其功能第11-12页
     ·CSFV 基因组编码的非结构蛋白及功能第12-13页
     ·非编码区及特性第13页
     ·CSFV 基因分型第13-14页
   ·猪瘟流行病学状况第14页
   ·常用的猪瘟疫苗第14-15页
     ·猪瘟标记疫苗第14页
     ·猪瘟弱毒疫苗第14-15页
   ·猪瘟实验室诊断技术第15-16页
     ·CSFV 常规实验室诊断技术第15-16页
     ·CSFV 分子诊断技术第16页
     ·猪瘟野毒株与疫苗株的鉴别诊断第16页
 2 高分辨率溶解曲线第16-18页
   ·适用于 HRM 的染料和仪器第17页
   ·HRM 的运用第17-18页
 3 本研究目的与意义第18-19页
第二章 猪瘟野毒株分离鉴定及与疫苗株 HRM 鉴别诊断第19-44页
 1 材料第19-22页
   ·病料的收集第19页
   ·主要试验试剂第19-20页
   ·宿主菌和质粒载体第20页
   ·试验所需溶液的配置第20页
   ·主要试验器材第20-21页
   ·参考的基因序列第21-22页
 2 方法第22-27页
   ·HRM 在线模拟和引物设计第22-23页
   ·血液、组织中病毒核酸的提取第23页
   ·反转录和 PCR 扩增第23-24页
     ·RNA 反转录第23页
     ·PCR 扩增反应第23-24页
   ·目的片段的克隆第24-26页
     ·PCR 产物的回收第24页
     ·目的片段与 pMD-18T 克隆载体的连接第24页
     ·TOP10 感受态细胞的制备第24-25页
     ·重组质粒的转化第25页
     ·阳性菌落的筛选、鉴定第25页
     ·重组质粒的提取第25-26页
   ·目的片段测序和序列分析第26页
   ·CSFV 野毒株与疫苗株 HRM 分析第26-27页
     ·野毒株与疫苗株 3′UTR 基因 HRM 溶解曲线分析第26页
     ·特异性试验分析第26页
     ·敏感性试验分析第26页
     ·重复性试验分析第26-27页
     ·野毒株与疫苗株混合感染模拟第27页
 3 结果与分析第27-42页
   ·NS5B 和 3′UTR 区域 PCR 扩增结果第27-29页
     ·NS5B 区域 PCR 扩增结果第27-28页
     ·猪瘟 3′UTR 区域 PCR 扩增结果第28-29页
   ·CSFV 测序序列和代表株的 NS5B 基因分析第29-32页
     ·NS5B 基因相似性分析第29-31页
     ·NS5B 基因遗传进化分析第31-32页
   ·CSFV 3′UTR 基因部分序列的分析第32-33页
   ·CSFV 病毒分离株与疫苗株 HRM 分析第33-37页
     ·病毒分离株和疫苗株 HRM 鉴别分析第33-37页
     ·PCR-HRM 敏感性分析第37页
   ·CSFV 3′UTR 区特异序列 HRM 模拟分析第37-39页
     ·参考株与实验分离株模拟曲线分析第37-38页
     ·HRM 动力模拟曲线分析第38-39页
   ·野毒株与疫苗株混合感染模拟第39-42页
 4 讨论第42-43页
   ·猪瘟分离株基因序列特征第42页
   ·猪瘟野毒株与疫苗弱毒株的 HRM 鉴别第42-43页
   ·猪瘟 HRM 模拟分析第43页
   ·猪瘟野毒株与疫苗弱毒株混合感染分析第43页
 5 结论第43-44页
第三章 HRM 分析方法中不同核酸片段、染料和仪器的比较第44-52页
 1 材料与方法第44-45页
   ·试验材料第44页
     ·试验试剂与样品第44页
     ·主要试验器材第44页
   ·RNA 病毒(CSFV 和 ALV)反转录第44页
   ·质粒的构建第44页
   ·溶解曲线在线模拟第44-45页
   ·不同扩增片段的 PCR-HRM 方法建立第45页
   ·不同染料的 HRM 比较第45页
   ·不同仪器之间的 HRM 比较第45页
 2 结果与分析第45-49页
   ·PCR 扩增产物凝胶电泳结果第45-46页
   ·核酸序列熔解曲线模拟结果第46-47页
   ·不同染料和扩增片段对 HRM 结果的影响第47-49页
   ·不同仪器对 HRM 结果的影响第49页
 3 讨论第49-51页
   ·不同扩增片段对 HRM 分析的影响第49-50页
   ·不同核酸染料对 HRM 分析的影响第50-51页
   ·不同仪器对 HRM 分析影响第51页
 4 结论第51-52页
参考文献第52-58页
致谢第58页

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