天门冬酰胺酶基因在黑曲霉中的同源表达
| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-22页 |
| ·研究目的与意义 | 第12-13页 |
| ·文献综述 | 第13-22页 |
| ·天门冬酰胺酶 | 第13-16页 |
| ·酶制剂产业的发展 | 第16-19页 |
| ·丝状真菌表达系统相关的研究 | 第19-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-32页 |
| ·实验材料 | 第22-25页 |
| ·菌种与载体 | 第22页 |
| ·试剂及酶类 | 第22页 |
| ·常用试剂配制 | 第22-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·主要实验仪器 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-32页 |
| ·菌株的培养和菌种保存 | 第25页 |
| ·黑曲霉基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| ·基因克隆与扩增 | 第26-28页 |
| ·根癌农杆菌介导的黑曲霉的遗传转化 | 第28-30页 |
| ·重组菌株天门冬酰胺酶活性测定 | 第30-31页 |
| ·重组菌株天门冬酰胺酶分泌蛋白的检测 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-41页 |
| ·天门冬酰胺酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第32-35页 |
| ·天门冬酰胺酶基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·黑曲霉表达载体pSZHG-Asp的构建 | 第33-35页 |
| ·根癌农杆菌介导的黑曲霉遗传转化 | 第35-37页 |
| ·表达载体pSZHG-Asp冻融法转化农杆菌 | 第35-36页 |
| ·农杆菌转化子与黑曲霉的共培养 | 第36页 |
| ·黑曲霉转化子的PCR鉴定 | 第36-37页 |
| ·天门冬酰胺酶在黑曲霉中的表达 | 第37-41页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第37-38页 |
| ·天门冬酰胺酶活性测定 | 第38-40页 |
| ·天门冬酰胺酶在重组菌株中的分泌表达 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| ·以丝状真菌作为表达系统的优势 | 第41页 |
| ·利用Berthelot显色反应测定酶活 | 第41-42页 |
| 5 结论 | 第42-43页 |
| ·天门冬酰胺酶基因克隆与扩增 | 第42页 |
| ·天门冬酰胺酶表达载体的构建 | 第42页 |
| ·根癌农杆菌介导的黑曲霉的遗传转化 | 第42页 |
| ·天门冬酰胺酶在黑曲霉中分泌表达 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| 攻读专业硕士学位期间发表的学术论文 | 第48页 |
