| 目录 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-16页 |
| ·前言 | 第12页 |
| ·海藻糖的性质 | 第12-13页 |
| ·海藻糖的生产方法 | 第13-15页 |
| ·海藻糖的应用 | 第15-16页 |
| ·在食品行业的应用 | 第15页 |
| ·在医药行业的应用 | 第15页 |
| ·在化妆品行业的应用 | 第15页 |
| ·在农业方面的应用 | 第15-16页 |
| 第二章 高效表达海藻糖合酶基因工程菌的构建 | 第16-54页 |
| ·引言 | 第16页 |
| ·材料与方法 | 第16-17页 |
| ·菌株与质粒 | 第16页 |
| ·主要试剂与材料 | 第16-17页 |
| ·主要仪器 | 第17页 |
| ·培养基与主要溶液 | 第17页 |
| ·实验方法 | 第17-20页 |
| ·Pseudomonas putida P09 基因组 DNA 的提取 | 第17-18页 |
| ·质粒的提取 | 第18页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第18-19页 |
| ·切胶纯化回收 DNA 片段 | 第19页 |
| ·DNA 电泳 | 第19页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第19-20页 |
| ·贮液配制 | 第19-20页 |
| ·制胶与电泳 | 第20页 |
| ·海藻糖检测方法 | 第20页 |
| ·TreS 基因的克隆、表达 | 第20-23页 |
| ·TreS 基因的克隆 | 第20-21页 |
| ·TreS 表达质粒的构建 | 第21-22页 |
| ·感受态细胞的制备和转化 | 第22-23页 |
| ·芽孢杆菌感受态制备与转化 | 第22页 |
| ·枯草芽孢杆菌转化 | 第22-23页 |
| ·重组菌的培养和诱导表达 | 第23页 |
| ·重组枯草芽孢杆菌的培养与表达 | 第23页 |
| ·海藻糖合酶表达水平测定 | 第23页 |
| ·结果与讨论 | 第23-33页 |
| ·BS108 电镜图及 TreS 基因序列 | 第23-24页 |
| ·BS108TreS 基因测序分析 | 第24-26页 |
| ·pET19b-TreS 重组质粒的构建与转化 | 第26-28页 |
| ·BL26（DE3）/pET19b-TreS 重组菌诱导表达 | 第28页 |
| ·pHT08-TreS 与 pHT48-TreS 重组质粒载体的构建 | 第28-33页 |
| ·BS108 的生长与 TreS 表达 | 第33-35页 |
| ·重组枯草芽孢杆菌摇瓶培养条件及培养基优化 | 第35-36页 |
| ·培养基与主要溶液 | 第35页 |
| ·菌体密度的测定 | 第35页 |
| ·细胞干重的测定 | 第35页 |
| ·SDS-PAGE 检测重组蛋白的表达 | 第35-36页 |
| ·工程菌传代稳定性试验 | 第36页 |
| ·重组 TreS 基因稳定性试验 | 第36页 |
| ·摇瓶种子活化培养 | 第36页 |
| ·pH 值对菌体生长的影响 | 第36页 |
| ·磷酸钾缓冲溶液添加量对菌体生长的影响 | 第36页 |
| ·结果与讨论 | 第36-44页 |
| ·pH 值对 B.subtilisW600/pHT08-TreS 生长的影响 | 第37-39页 |
| ·pH 对蛋白表达的影响 | 第39-40页 |
| ·温度对菌体生长和表达的影响 | 第40页 |
| ·溶氧量对菌体生长和表达的影响 | 第40-41页 |
| ·不同氮源对菌体生长的影响 | 第41-43页 |
| ·钾盐缓冲溶液对菌体生长的影响 | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-46页 |
| ·细菌纤维素的提取和处理 | 第45页 |
| ·固定化透性细胞的制备 | 第45-46页 |
| ·固定化细胞酶活力的测定 | 第46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-54页 |
| ·细胞固定化前后电镜图片 | 第46-47页 |
| ·固定化条件优化 | 第47-49页 |
| ·固定化透性细胞海藻糖合酶的性质 | 第49-51页 |
| ·底物浓度对海藻糖产率的影响 | 第51页 |
| ·不同温度对麦芽糖转化率的影响 | 第51-54页 |
| 第三章 海藻糖的分离 | 第54-74页 |
| ·引言 | 第54页 |
| ·实验材料 | 第54-55页 |
| ·材料试剂 | 第54-55页 |
| ·仪器设备 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-59页 |
| ·菌体破碎条件的选择 | 第55页 |
| ·粗酶转化条件的优化 | 第55页 |
| ·混合糖液预处理及树脂筛选 | 第55-57页 |
| ·模拟移动床分离过程的设计和优化 | 第57-59页 |
| ·实验结果与讨论： | 第59-74页 |
| ·酶反应条件的优化 | 第59-61页 |
| ·pH 值对酶转化的影响 | 第59-60页 |
| ·反应温度对粗酶转化的影响 | 第60页 |
| ·不同底物浓度对酶转化率的影响 | 第60-61页 |
| ·混合糖液预处理及树脂筛选 | 第61-67页 |
| ·混合糖液脱色脱盐结果 | 第61-62页 |
| ·静态筛选结果 | 第62-67页 |
| ·单柱优化结果 | 第67-74页 |
| ·单柱评价结果 | 第67-68页 |
| ·SMB 初始操作参数的设定 | 第68-71页 |
| ·SMB 实际优化结果 | 第71-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
