| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-16页 |
| ·鲫鱼简介 | 第12-13页 |
| ·肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶的研究现状 | 第13-14页 |
| ·大肠杆菌表达系统和酵母表达系统 | 第14-15页 |
| ·蛋白质质谱鉴定中的工具酶 | 第15页 |
| ·研究目的和意义 | 第15-16页 |
| 第2章 鲫鱼 MBSP 的基因克隆及毕赤酵母表达菌株的构建 | 第16-42页 |
| ·材料 | 第16-20页 |
| ·实验动物 | 第16页 |
| ·试剂及药品 | 第16页 |
| ·菌株及载体 | 第16-17页 |
| ·实验所需溶液及其配制 | 第17-18页 |
| ·主要培养基配制 | 第18-19页 |
| ·所用主要仪器 | 第19-20页 |
| ·方法 | 第20-29页 |
| ·引物设计 | 第20-21页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第21页 |
| ·cDNA 的合成及 MBSP 基因序列的扩增 | 第21-22页 |
| ·鲫鱼 MBSP 基因（MBSP）的 T 克隆、测序及其序列分析 | 第22-24页 |
| ·重组酵母表达质粒 pPIC9K-MBSP2 的构建 | 第24-25页 |
| ·重组鲫鱼 MBSP 酵母表达菌株的构建 | 第25-29页 |
| ·结果与分析 | 第29-41页 |
| ·鲫鱼 MBSP 基因的扩增 | 第29-31页 |
| ·鲫鱼 MBSP 基因的 T 克隆及测序 | 第31-32页 |
| ·鲫鱼 MBSP 基因片段测序及其序列分析 | 第32-34页 |
| ·鲫鱼 MBSP 理化参数预测 | 第34页 |
| ·重组酵母表达质粒 pPIC9K-MBSP2 的构建 | 第34-37页 |
| ·重组鲫鱼 MBSP 毕赤酵母表达菌株的构建 | 第37-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第3章 重组鲫鱼 MBSP 表达菌株的高密度发酵及重组鲫鱼 MBSP 的纯化 | 第42-56页 |
| ·材料 | 第42-45页 |
| ·菌种 | 第42页 |
| ·主要试剂及药品 | 第42页 |
| ·实验所需溶液及其配制 | 第42-43页 |
| ·主要培养基配制 | 第43-44页 |
| ·所用主要仪器 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-49页 |
| ·种子培养 | 第45页 |
| ·发酵过程 | 第45页 |
| ·发酵过程中的参数测定 | 第45-46页 |
| ·硫酸铵沉淀 | 第46-47页 |
| ·离子交换层析 | 第47页 |
| ·超滤脱盐、浓缩及冷冻干燥 | 第47页 |
| ·酶活测定 | 第47-49页 |
| ·结果与讨论 | 第49-54页 |
| ·发酵过程中取样实测数据 | 第49页 |
| ·发酵过程中的生长曲线和湿重曲线 | 第49-50页 |
| ·发酵过程培养基上清的 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第50-51页 |
| ·硫酸铵分级沉淀中硫酸铵饱和度范围的确定 | 第51-52页 |
| ·离子交换层析结果 | 第52-54页 |
| ·重组鲫鱼 MBSP 的纯化表格 | 第54页 |
| ·重组鲫鱼 MBSP 的生产工艺流程 | 第54页 |
| ·本章小结 | 第54-56页 |
| 第4章 重组鲫鱼 MBSP 的酶学特性及其作为蛋白工具酶的应用研究 | 第56-72页 |
| ·材料 | 第56-57页 |
| ·实验动物 | 第56页 |
| ·主要试剂及药品 | 第56页 |
| ·实验所需溶液及其配制 | 第56-57页 |
| ·所用仪器 | 第57页 |
| ·方法 | 第57-60页 |
| ·重组鲫鱼 MBSP 的酶学特性研究 | 第57-60页 |
| ·重组鲫鱼 MBSP 作为蛋白工具酶的应用研究 | 第60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-70页 |
| ·重组鲫鱼 MBSP 的底物特异性分析 | 第60-61页 |
| ·重组鲫鱼 MBSP 的性质分析 | 第61-63页 |
| ·不同蛋白酶抑制剂、表面活性剂、还原剂、变性剂和金属离子对重组鲫鱼 MBSP 的影响 | 第63-65页 |
| ·重组鲫鱼 MBSP 对鲫鱼肌原纤维蛋白的降解情况 | 第65-66页 |
| ·重组鲫鱼 MBSP 与蛋白内切酶 Lys-C 的酶动力学参数及酶学性质比较 | 第66-69页 |
| ·重组鲫鱼 MBSP 对几种典型蛋白质的降解情况 | 第69-70页 |
| ·本章小结 | 第70-72页 |
| 第5章 结论和展望 | 第72-74页 |
| ·结论 | 第72-73页 |
| ·展望 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-78页 |
| 附录 | 第78-80页 |
| 在学期间发表的学术文章 | 第80页 |
