| 摘要 | 第1-10页 |
| 第一章 文章综述 | 第10-21页 |
| ·我国紫花苜蓿育成品种现状 | 第10页 |
| ·紫花苜蓿基因工程研究进展 | 第10-13页 |
| ·品质改良 | 第10-12页 |
| ·耐逆性研究 | 第12-13页 |
| ·解旋酶 | 第13-20页 |
| ·解旋酶的定义 | 第13页 |
| ·解旋酶分类与结构特点 | 第13-14页 |
| ·解旋酶家族成员的细胞功能 | 第14-17页 |
| ·解旋酶基因与逆境胁迫 | 第17-20页 |
| ·本研究的目的、内容以及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 紫花苜蓿MsRH基因克隆及生物信息学分析 | 第21-36页 |
| ·试验材料 | 第21-23页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·菌株、载体与试剂 | 第21页 |
| ·仪器设备 | 第21-22页 |
| ·溶液与培养基 | 第22-23页 |
| ·试验方法与原理 | 第23-29页 |
| ·紫花苜蓿总RNA提取 | 第23页 |
| ·引物合成 | 第23-24页 |
| ·目的基因3’末端序列克隆 | 第24-25页 |
| ·目的基因5’末端序列克隆 | 第25-26页 |
| ·PCR产物的回收 | 第26-27页 |
| ·PCR产物连接载体 | 第27页 |
| ·连接产物转化DH5α | 第27-28页 |
| ·单克隆挑取、鉴定与测序 | 第28页 |
| ·序列分析 | 第28-29页 |
| ·结果与分析 | 第29-35页 |
| ·紫花苜蓿总RNA的检测 | 第29页 |
| ·目的基因全长序列的获得 | 第29-31页 |
| ·MsRH基因编码蛋白序列分析 | 第31-35页 |
| ·小结 | 第35-36页 |
| 第三章 MsRH基因的亚细胞定位 | 第36-43页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·植物材料 | 第36页 |
| ·克隆载体与菌株 | 第36页 |
| ·主要生化试剂及工具酶 | 第36页 |
| ·引物设计 | 第36页 |
| ·主要仪器设备 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-40页 |
| ·构建重组质粒pMD-MsRH | 第37页 |
| ·提取质粒 | 第37-38页 |
| ·构建融合表达载体PA7-GFP-MsRH | 第38-39页 |
| ·基因枪制备金粉悬液 | 第39页 |
| ·基因枪子弹的制备 | 第39页 |
| ·重组质粒PA7-GFP-MsRH转化洋葱及检测 | 第39-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-41页 |
| ·融合表达载体PA7-GFP-MsRH的构建及鉴定 | 第40-41页 |
| ·MsRH蛋白亚细胞定位 | 第41页 |
| ·小结 | 第41-43页 |
| 第四章 紫花苜蓿MsRH基因的表达分析 | 第43-48页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·植物材料与仪器 | 第43页 |
| ·引物合成 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-45页 |
| ·获得材料 | 第43-44页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第44页 |
| ·计算MsRH基因的相对表达量 | 第44-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-47页 |
| ·MsRH基因在NaCl胁迫条件下的表达特性 | 第45页 |
| ·MsRH基因在PEG6000胁迫条件下的表达特性 | 第45-46页 |
| ·MsRH基因在ABA胁迫条件下的表达特性 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 第五章 MsRH基因超表达载体的构建 | 第48-54页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·克隆载体与菌株 | 第48页 |
| ·生化试剂及工具酶 | 第48页 |
| ·溶液与培养基 | 第48-49页 |
| ·引物合成 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-51页 |
| ·超表达载体pBI121-MsRH的构建 | 第49-51页 |
| ·超表达载体pBI121-MsRH的农杆菌转化 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-53页 |
| ·构建表达载体PBI-MsRH的酶切鉴定 | 第51-52页 |
| ·PBI121-MsRH表达载体农杆菌转化PCR检测 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 第六章 MsRH基因对烟草的遗传转化及耐盐性评价 | 第54-63页 |
| ·材料 | 第54页 |
| ·生化试剂 | 第54页 |
| ·溶液与培养基 | 第54-55页 |
| ·方法步骤 | 第55-58页 |
| ·农杆菌准备 | 第55页 |
| ·农杆菌介导的叶盘法转化烟草 | 第55页 |
| ·转基因烟草检测 | 第55-58页 |
| ·结果与分析 | 第58-61页 |
| ·烟草转化 | 第58页 |
| ·转基因烟草的GUS检测 | 第58页 |
| ·转基因烟草检测 | 第58-59页 |
| ·转基因烟草耐盐性评价 | 第59-61页 |
| ·小结 | 第61-63页 |
| 第七章 MsRH基因对拟南芥的遗传转化及初步鉴定 | 第63-71页 |
| ·材料 | 第63页 |
| ·植物材料 | 第63页 |
| ·生化试剂 | 第63页 |
| ·溶液与培养基 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-65页 |
| ·拟南芥的种植 | 第63-64页 |
| ·农杆菌的准备 | 第64页 |
| ·花序侵染法转化拟南芥 | 第64页 |
| ·T_2代转基因拟南芥的筛选 | 第64-65页 |
| ·转基因拟南芥T_2代植株的PCR检测和RT-PCR检测 | 第65页 |
| ·转基因拟南芥T_2代植株的GUS报告基因组织化学检测 | 第65页 |
| ·逆境胁迫下转基因植株根生长比较 | 第65页 |
| ·结果与分析 | 第65-70页 |
| ·转基因拟南芥T_2代植株的获得 | 第65-66页 |
| ·转基因拟南芥T_2代植株的PCR检测和RT-PCR检测 | 第66-67页 |
| ·转基因拟南芥T_2代植株的GUS检测 | 第67页 |
| ·T_2代转MsRH基因拟南芥逆境胁迫下根生长受到抑制 | 第67-70页 |
| ·小结 | 第70-71页 |
| 第八章 讨论、结论与展望 | 第71-74页 |
| ·讨论 | 第71-72页 |
| ·结论 | 第72-73页 |
| ·展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| ABSTRACT | 第80-82页 |
| 附录 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
