| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 1 绪论 | 第14-35页 |
| ·梅花鹿的濒危现状 | 第14-16页 |
| ·野生梅花鹿的现存状况 | 第14-15页 |
| ·野生梅花鹿的濒危原因 | 第15-16页 |
| ·野生动物体细胞库的建立 | 第16-18页 |
| ·动物资源保存的方法 | 第16页 |
| ·建立野生动物体细胞库的必要性 | 第16-17页 |
| ·动物细胞培养的发展简史 | 第17页 |
| ·动物细胞系的建立 | 第17-18页 |
| ·提高体细胞全能性的方法与手段 | 第18-23页 |
| ·化合物的添加 | 第19页 |
| ·蛋白因子的添加 | 第19-20页 |
| ·基因的阻断和介入 | 第20页 |
| ·诱导细胞系的选择 | 第20-22页 |
| ·培养条件的优化 | 第22-23页 |
| ·基因替代性小分子化合物的添加 | 第23页 |
| ·Reversine的去分化作用原理及其应用前景 | 第23-26页 |
| ·经Reversine处理的成体细胞向不同胚层方向的分化及原理 | 第23-25页 |
| ·Reversine的目的作用蛋白 | 第25-26页 |
| ·Reversine对核移植胚胎的影响及面临的问题 | 第26页 |
| ·异种核移植 | 第26-35页 |
| ·异种核移植的概念 | 第27页 |
| ·异种细胞核移植技术研究历史和现状 | 第27-29页 |
| ·异种细胞核移植的意义 | 第29页 |
| ·异种核移植存在的问题以及可能的解决方法 | 第29-31页 |
| ·提高异种核移植胚胎重编程能力的方法 | 第31-35页 |
| 2 东北梅花鹿成纤维细胞库的构建 | 第35-42页 |
| ·前言 | 第35页 |
| ·材料 | 第35-36页 |
| ·实验动物来源 | 第35页 |
| ·实验用仪器设备 | 第35-36页 |
| ·主要实验试剂 | 第36页 |
| ·主要溶液的配置方法 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-38页 |
| ·细胞原代培养 | 第36-38页 |
| ·结果 | 第38-40页 |
| ·梅花鹿原代细胞培养及形态学观察 | 第38-39页 |
| ·细胞活率计算 | 第39页 |
| ·细胞生长的动态观察 | 第39页 |
| ·核型分析 | 第39-40页 |
| ·梅花鹿的染色体测量参数 | 第40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| ·细胞纯化 | 第40-41页 |
| ·无菌环境对细胞培养的重要性 | 第41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 3 Reversine对梅花鹿成纤维细胞重编程能力的影响 | 第42-63页 |
| ·前言 | 第42页 |
| ·材料 | 第42-44页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·实验仪器 | 第42页 |
| ·主要实验试剂 | 第42页 |
| ·主要实验试剂的配置 | 第42-44页 |
| ·实验方法 | 第44-49页 |
| ·Reversine处理梅花鹿成纤维细胞 | 第44页 |
| ·细胞周期检测 | 第44页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第44页 |
| ·间接免疫荧光法 | 第44-45页 |
| ·RT-PCR检测 | 第45-48页 |
| ·向成骨细胞诱导分化及鉴定 | 第48页 |
| ·向脂肪细胞诱导分化 | 第48-49页 |
| ·向肝样细胞诱导分化 | 第49页 |
| ·结果 | 第49-60页 |
| ·Reversine对细胞形态,周期及活力的影响 | 第49-51页 |
| ·Reversine对细胞增殖能力的影响 | 第51页 |
| ·Reversine对细胞骨架的影响 | 第51-53页 |
| ·Reversine对细胞分化多潜能性的影响 | 第53-58页 |
| ·Reversine对细胞组蛋白修饰水平的影响 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| ·Reversine对细胞生长和增殖的特点 | 第60页 |
| ·诱导分化 | 第60-61页 |
| ·表观遗传修饰水平对细胞重编程能力的影响 | 第61页 |
| ·小结 | 第61-63页 |
| 4 Reversine对梅花鹿异种核移植胚胎重编程能力的影响 | 第63-79页 |
| ·前言 | 第63页 |
| ·材料 | 第63页 |
| ·主要实验仪器 | 第63-66页 |
| ·主要实验试剂 | 第64-65页 |
| ·主要溶液的配制 | 第65-66页 |
| ·方法 | 第66-67页 |
| ·卵母细胞采集与体外成熟 | 第66页 |
| ·供体细胞的准备 | 第66页 |
| ·异种核移植 | 第66页 |
| ·Reversine处理核移植胚胎 | 第66页 |
| ·重构胚的激活与培养 | 第66-67页 |
| ·异种重构胚的间接免疫荧光检测 | 第67页 |
| ·异种重构胚染色体分析 | 第67页 |
| ·结果 | 第67-76页 |
| ·牛卵母细胞体外成熟及异种核移植胚胎发育 | 第67-69页 |
| ·Reversine对牛-鹿异种核移植胚胎发育水平的影响 | 第69页 |
| ·异构胚染色体分析 | 第69-70页 |
| ·Reversine对核移植胚胎连接组蛋白的影响 | 第70-76页 |
| ·讨论 | 第76-77页 |
| ·牛-鹿异种核移植胚胎的发育水平 | 第76页 |
| ·异构胚遗传物质的鉴定 | 第76-77页 |
| ·Reversine对核移植胚胎连接组蛋白表达模式的影响 | 第77页 |
| ·小结 | 第77-79页 |
| 结论 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-94页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
