| 致谢 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| 1. PCR 技术简介 | 第11-14页 |
| ·PCR 简史 | 第11页 |
| ·PCR 技术基本原理 | 第11-12页 |
| ·PCR 反应体系 | 第12页 |
| ·PCR 反应条件 | 第12-13页 |
| ·PCR 分类 | 第13-14页 |
| 2 RT-PCR 技术 | 第14-17页 |
| ·RT-PCR 简介 | 第14-15页 |
| ·RT-PCR 反转录酶的选择 | 第15页 |
| ·RT-PCR 引物设计原则 | 第15-16页 |
| ·RT-PCR 技术在动物、植物病毒病检测中的的应用 | 第16-17页 |
| 3 RQ-PCR 技术原理及方法 | 第17-21页 |
| ·RQ-PCR 的分类 | 第17-19页 |
| ·染料法 | 第17-18页 |
| ·探针法 | 第18-19页 |
| ·探针 | 第18页 |
| ·分子信标(Molecular Beacon) | 第18-19页 |
| ·杂交探针( Hybridization Probe) | 第19页 |
| ·LUX Primers | 第19页 |
| ·RQ-PCR 技术的主要应用 | 第19-20页 |
| ·在病原微生物方面的应用 | 第19-20页 |
| ·在肿瘤方面的应用 | 第20页 |
| ·前景 | 第20-21页 |
| 4 鸡生长与免疫抑制综合征(CSIS-ZZ2004 毒株)研究进展 | 第21-24页 |
| ·流行病学和临床症状 | 第21页 |
| ·病毒的结构形态 | 第21页 |
| ·病毒的生长特性 | 第21-22页 |
| ·病毒在 SPF 鸡胚上的生长特性 | 第22页 |
| ·病毒在细胞上的生长情况 | 第22页 |
| ·病毒鉴定 | 第22-24页 |
| 引 言 | 第24-26页 |
| 第二章 CSISV RT-PCR 检测方法的建立 | 第26-39页 |
| 1 材料与方法 | 第26-30页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·病毒 | 第26页 |
| ·试验动物 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要试剂的配制 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-30页 |
| ·CSISV 鸡胚培养 | 第27页 |
| ·鸡胚尿囊液的处理 | 第27页 |
| ·引物的设计与合成 | 第27页 |
| ·RNA 的提取及 cDNA 的制备 | 第27-28页 |
| ·RNA 的提取 | 第28页 |
| ·cDNA 的制备 | 第28页 |
| ·RT-PCR 反应体系的初步建立 | 第28-29页 |
| ·dNTP 浓度的优化 | 第29页 |
| ·引物浓度的优化 | 第29页 |
| ·引物退火温度的选择 | 第29页 |
| ·产物检测 | 第29页 |
| ·引物特异性鉴定 | 第29-30页 |
| ·cDNA 敏感性鉴定 | 第30页 |
| ·重复性试验 | 第30页 |
| ·人工感染样品的 RT-PCR 检测 | 第30页 |
| 2 结果 | 第30-37页 |
| ·dNTP 浓度的优化 | 第30页 |
| ·引物浓度的优化 | 第30-31页 |
| ·引物退火温度 | 第31-32页 |
| ·优化后的最佳 RT-PCR 反应体系及条件 | 第32页 |
| ·CSISV RT-PCR 产物琼脂糖凝胶电泳结果 | 第32页 |
| ·RT-PCR 特异性试验 | 第32-33页 |
| ·RT-PCR 敏感性试验 | 第33页 |
| ·重复性试验 | 第33-34页 |
| ·人工感染样品的检测 | 第34-37页 |
| 3 分析与讨论 | 第37-39页 |
| ·CSISV 体系优化 | 第37页 |
| ·引物特异性 | 第37-38页 |
| ·cDNA 敏感性及重复性 | 第38页 |
| ·人工感染样品检测 | 第38-39页 |
| 第三章 荧光定量 RT-PCR 检测方法的建立 | 第39-54页 |
| 1 材料与方法 | 第39-45页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·病毒 | 第39页 |
| ·试验动物 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39-40页 |
| ·主要试剂的配制 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-45页 |
| ·CSISV 鸡胚培养 | 第40页 |
| ·鸡胚尿囊液的处理 | 第40页 |
| ·引物的设计与合成 | 第40页 |
| ·RNA 的提取及 cDNA 的制备 | 第40-41页 |
| ·RNA 的提取 | 第40-41页 |
| ·cDNA 的合成 | 第41页 |
| ·cDNA 的定量及稀释 | 第41页 |
| ·荧光定量 RT-PCR 初步反应体系 | 第41-42页 |
| ·F_3/F_4 对引物常规 RT-PCR 检测方法的建立 | 第42页 |
| ·探针量的优化 | 第42-43页 |
| ·引物量的优化 | 第43页 |
| ·dNTP 量的优化 | 第43-44页 |
| ·退火温度的优化 | 第44页 |
| ·TaqMan 荧光定量 RT-PCR 标准曲线的建立 | 第44页 |
| ·荧光定量 RT-PCR 特异性 | 第44页 |
| ·RT-PCR 与 荧光定量 RT-PCR 敏感性比较 | 第44-45页 |
| ·重复性检测 | 第45页 |
| ·人工感染样品的荧光定量 RT-PCR 检测 | 第45页 |
| 2 结果 | 第45-52页 |
| ·反应体系中各组分的优化 | 第45-48页 |
| ·标准曲线的建立 | 第48页 |
| ·荧光定量 RT-PCR 特异性 | 第48-49页 |
| ·荧光定量 RT-PCR 重复性实验 | 第49-50页 |
| ·荧光定量 RT-PCR 与常规 RT-PCR 的灵敏度比较 | 第50-52页 |
| ·人工感染样品的荧光定量 RT-PCR 检测结果 | 第52页 |
| 3 分析与讨论 | 第52-54页 |
| 结 论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| ABSTRACT | 第61-62页 |
