| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-29页 |
| ·活性氧和氧化还原平衡 | 第14-17页 |
| ·活性氧的产生 | 第14-15页 |
| ·活性氧的生理功能 | 第15-16页 |
| ·活性氧对机体的损伤 | 第16-17页 |
| ·生物体中的抗氧化防御体系 | 第17-27页 |
| ·细胞内主要的非酶抗氧化剂 | 第18-19页 |
| ·维生素C | 第18页 |
| ·维生素E | 第18-19页 |
| ·β-胡萝卜素 | 第19页 |
| ·还原型谷胱甘肽 | 第19页 |
| ·细胞内主要的酶抗氧化剂 | 第19-27页 |
| ·超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD,EC 1.15.1.1) | 第19-20页 |
| ·过氧化氢酶(Catalase,CAT,EC 1.11.1.6) | 第20页 |
| ·谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GPx,EC 1.11.1.9) | 第20-21页 |
| ·过氧化物还原酶(Peroxiredoxin,Prx,EC 1.11.1.15) | 第21-27页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第27-29页 |
| ·目的 | 第27页 |
| ·意义 | 第27-29页 |
| 第2章 七鳃鳗Prx2基因的分子克隆及生物信息学分析 | 第29-53页 |
| ·七鳃鳗口腔腺Prx2的基因克隆 | 第29-33页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-33页 |
| ·引物设计 | 第30页 |
| ·提取总RNA | 第30-31页 |
| ·逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第31-32页 |
| ·目的片段与载体相连及鉴定 | 第32-33页 |
| ·七鳃鳗Prx2推导的氨基酸序列生物信息学分析 | 第33-34页 |
| ·数据库和软件 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-34页 |
| ·一级结构分析 | 第33-34页 |
| ·拓扑结构分析和二级结构预测 | 第34页 |
| ·三级结构模拟 | 第34页 |
| ·同源序列比对 | 第34页 |
| ·系统发育分析 | 第34页 |
| ·脊椎动物Prx家族进化分析 | 第34-35页 |
| ·数据库和软件 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35页 |
| ·Prx家族成员的识别 | 第35页 |
| ·序列比对和结构域变化位点分析 | 第35页 |
| ·系统发育分析 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-49页 |
| ·七鳃鳗Prx2的基因克隆 | 第35-36页 |
| ·七鳃鳗Prx2基因编码氨基酸序列生物信息学分析 | 第36-43页 |
| ·脊椎动物Prx蛋白家族进化分析 | 第43-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| ·小结 | 第51-53页 |
| 第3章 七鳃鳗Prx2基因表达、蛋白纯化及多克隆抗体的制备 | 第53-74页 |
| ·实时荧光定量PCR法检测Prx2的表达 | 第53-56页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·方法 | 第54-56页 |
| ·分离七鳃鳗外周血红细胞和白细胞 | 第54页 |
| ·Total RNA提取 | 第54页 |
| ·RNA质量检测 | 第54页 |
| ·Real Time PCR法检测目的基因的相对表达量 | 第54-56页 |
| ·七鳃鳗Prx2基因原核表达及重组蛋白纯化 | 第56-62页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-62页 |
| ·设计引物 | 第56-57页 |
| ·PCR扩增 | 第57页 |
| ·目的片段回收 | 第57页 |
| ·目的片段与载体相连 | 第57页 |
| ·转化 | 第57-58页 |
| ·重组表达菌的鉴定 | 第58页 |
| ·阳性重组子的诱导表达 | 第58-59页 |
| ·分别采用包涵体和可溶性蛋白的提取方法对诱导表达的重组蛋白进行提取和鉴定 | 第59页 |
| ·SDS-PAGE鉴定 | 第59-60页 |
| ·Western blot鉴定 | 第60-61页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第61-62页 |
| ·重组蛋白浓度测定 | 第62页 |
| ·兔抗七鳃鳗血清Prx2蛋白多克隆抗体的制备及检测 | 第62-66页 |
| ·材料 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-66页 |
| ·抗原乳化 | 第63页 |
| ·抗体制备 | 第63-64页 |
| ·ELISA法测定抗体效价 | 第64-66页 |
| ·抗体结合能力检测 | 第66页 |
| ·结果 | 第66-71页 |
| ·Prx2基因在七鳃鳗各组织中的相对表达量 | 第66-67页 |
| ·重组载体的构建及原核表达 | 第67-70页 |
| ·兔抗七鳃鳗血清Prx2多克隆抗体的制备和效价测定 | 第70-71页 |
| ·抗体结合能力检测 | 第71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| ·小结 | 第73-74页 |
| 第4章 重组蛋白活性测定 | 第74-85页 |
| ·重组蛋白分泌特性检测 | 第74-75页 |
| ·材料 | 第74页 |
| ·方法 | 第74-75页 |
| ·SDS-PAGE | 第74页 |
| ·Western blot检测 | 第74-75页 |
| ·免疫组化法检测Prx2在口腔腺中的分布情况 | 第75-76页 |
| ·材料 | 第75页 |
| ·方法 | 第75-76页 |
| ·石蜡切片的制备 | 第75页 |
| ·HE染色 | 第75-76页 |
| ·免疫组化染色 | 第76页 |
| ·重组蛋白过氧化物酶活性检测 | 第76-77页 |
| ·材料 | 第76页 |
| ·方法 | 第76-77页 |
| ·DNA缺刻实验 | 第77-78页 |
| ·材料 | 第77页 |
| ·方法 | 第77-78页 |
| ·结果 | 第78-82页 |
| ·分泌特性鉴定 | 第78页 |
| ·免疫组化法检测Prx2在口腔腺中的分布 | 第78页 |
| ·过氧化物酶活性检测 | 第78-82页 |
| ·DNA缺刻实验 | 第82页 |
| ·讨论 | 第82-84页 |
| ·小结 | 第84-85页 |
| 第5章 结论 | 第85-86页 |
| 本论文的创新点 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-96页 |
| 附录 | 第96-124页 |
| 附录1 Lj-Prx2 DNA测序结果 | 第96-97页 |
| 附录2 ExPASy和NCBI数据库中搜索到的已知的脊椎动物过氧化物还原酶家族氨基酸序列(FASTA格式文件) | 第97-110页 |
| 附录3 脊椎动物过氧化物还原酶家族氨基酸序列分析 | 第110-117页 |
| 附录4 pET23b质粒图谱 | 第117-118页 |
| 附录5 RNA iso Reagent提取七鳃鳗口腔腺、心脏、肝脏、肾脏、鳃、肠、红细胞和白细胞共计48个组织样品的RNA OD值 | 第118-120页 |
| 附录6 实时荧光定量PCR管家基因GAPDH和目的基因Prx2标准曲线 | 第120-122页 |
| 附录7 pET23b-Prx2表达载体构建 | 第122-123页 |
| 附录8 ExPASy数据库secretomeP程序分析rLj-Prx2分泌特性 | 第123-124页 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文情况 | 第124-125页 |
| 致谢 | 第125页 |
