| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 英文缩略词索引 | 第12-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-32页 |
| ·精子获能 | 第16页 |
| ·哺乳动物精子磷酸化蛋白质组学 | 第16-18页 |
| ·哺乳动物精子磷酸化蛋白质组学的主要研究方法 | 第18-22页 |
| ·磷酸化蛋白质和磷酸肽的分离富集主要方法 | 第18-20页 |
| ·生物质谱分析磷酸化位点 | 第20-21页 |
| ·磷酸化蛋白质定量技术 | 第21-22页 |
| ·哺乳动物精子蛋白磷酸化修饰的特点 | 第22-23页 |
| ·哺乳动物精子磷酸化蛋白质组学研究的技术方法及难点 | 第23-24页 |
| ·哺乳动物精子磷酸化蛋白质组学研究的主要技术方法 | 第23页 |
| ·哺乳动物精子磷酸化蛋白质组学研究的技术难点 | 第23-24页 |
| ·哺乳动物精子蛋白磷酸化修饰相应的酶类及调控通路 | 第24-25页 |
| ·哺乳动物精子磷酸化蛋白质组学的研究现状 | 第25-30页 |
| ·利用 SDS-PAGE 与质谱结合技术鉴定精子磷酸化蛋白 | 第25页 |
| ·利用 TD-WB 与质谱结合技术测定精子磷酸化蛋白 | 第25-28页 |
| ·富集技术结合质谱法在哺乳动物精子磷酸化蛋白质组学的应用 | 第28-30页 |
| ·猪获能精子磷酸化蛋白质组学研究（本研究）的意义 | 第30-32页 |
| 第二章 TD-WB 技术结合质谱技术鉴定获能猪精子酪氨酸磷酸化蛋白质 | 第32-46页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·实验试剂 | 第33-35页 |
| ·精子培养及细胞裂解液 | 第33页 |
| ·双向凝胶电泳缓冲液 | 第33-34页 |
| ·染液 | 第34-35页 |
| ·TD-WB 相关缓冲液 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-39页 |
| ·精子细胞的获能培养 | 第35页 |
| ·精子蛋白的提取 | 第35-36页 |
| ·精子蛋白的 TD 及 TD-WB | 第36-38页 |
| ·第一向等电聚焦 | 第36-37页 |
| ·SDS-PAGE | 第37-38页 |
| ·精子酪氨酸磷酸化蛋白检测（TD-WB） | 第38页 |
| ·图像采集及软件分析 | 第38页 |
| ·胶内酶切消化 | 第38-39页 |
| ·质谱鉴定 | 第39页 |
| ·实验结果 | 第39-43页 |
| ·新鲜猪鲜精子及获能培养后精子活力指标检测结果 | 第39-40页 |
| ·猪精子蛋白 TD 与 TD-WB 图谱 | 第40-42页 |
| ·猪获能精子细胞酪氨酸磷酸化蛋白的质谱鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-46页 |
| 第三章 免疫沉淀技术富集获能猪精子酪氨酸磷酸化蛋白质的鉴定及功能分析 | 第46-64页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-51页 |
| ·精子细胞处理及获能培养 | 第47页 |
| ·精子蛋白的提取 | 第47-48页 |
| ·免疫沉淀实验 | 第48-49页 |
| ·精子酪氨酸磷酸化蛋白富集结果（Western Blotting）验证 | 第49页 |
| ·富集蛋白的质谱检测 | 第49-51页 |
| (1) 样品制备 | 第50页 |
| (2) 磷酸化肽段的富集 | 第50页 |
| (3) 质谱分析 | 第50-51页 |
| ·结果 | 第51-61页 |
| ·酪氨酸磷酸化蛋白富集 Western-Blotting 验证结果 | 第51-52页 |
| ·质谱鉴定结果 | 第52-61页 |
| ·讨论 | 第61-64页 |
| 第四章 获能猪精子全蛋白磷酸化蛋白质组学分析及信号转导网络的构建 | 第64-78页 |
| ·材料 | 第64-65页 |
| ·方法 | 第65-66页 |
| ·精子细胞的获能培养及蛋白的提取 | 第65页 |
| ·TiO2对磷酸化肽段的富集及 LTQ-MS/MS 检测 | 第65页 |
| ·生物信息学对鉴定结果的分析 | 第65-66页 |
| ·实验结果 | 第66-75页 |
| ·猪获能精子的 Ser/Thr/Tyr 磷酸化蛋白质组学研究 | 第66-67页 |
| ·获能猪精子磷酸化蛋白质的功能分类 | 第67-73页 |
| ·猪获能精子信号转导磷酸化蛋白质及其相互作用蛋白网络图 | 第73-75页 |
| ·讨论 | 第75-78页 |
| 第五章 总结与展望 | 第78-80页 |
| ·总结 | 第78-79页 |
| ·展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第91页 |
