| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第10-24页 |
| 1.1 miRNA概述 | 第10-19页 |
| 1.1.1 miRNA的合成途径 | 第11-12页 |
| 1.1.2 miRNA命名原则 | 第12-13页 |
| 1.1.3 miRNA介导的mRNA沉默 | 第13页 |
| 1.1.4 miRNA的生物学功能研究 | 第13-14页 |
| 1.1.5 miRNA的起源和进化 | 第14-15页 |
| 1.1.6 miRNA的鉴定 | 第15页 |
| 1.1.7 miRNA靶基因预测 | 第15-17页 |
| 1.1.8 疱疹病毒编码miRNA的功能研究进展 | 第17-18页 |
| 1.1.9 mRNA逃避miRNA靶向作用的机制 | 第18-19页 |
| 2.1 MHC Ⅰ类分子的抗原加工与递呈功能 | 第19-21页 |
| 3.1 多肽装载复合物的功能研究 | 第21-22页 |
| 4.1 病毒干扰抗原递呈的策略 | 第22-24页 |
| 4.1.1 抑制抗原肽的生成 | 第22页 |
| 4.1.2 抑制MHC Ⅰ基因的表达 | 第22页 |
| 4.1.3 阻断TAP的抗原通道功能 | 第22-23页 |
| 4.1.4 降解MHC Ⅰ类分子 | 第23-24页 |
| 试验一 茎环引物RT-qPCR检测PRV感染PK-15 细胞后prv-miR-LLT11a的表达时相 | 第24-30页 |
| 1 材料和方法 | 第24-26页 |
| 1.1 病毒与细胞 | 第24-25页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第25页 |
| 1.3 待测样品的制备 | 第25页 |
| 1.4 小RNA提取与反转录 | 第25页 |
| 1.5 引物设计 | 第25-26页 |
| 1.6 RT-qPCR检测prv-miR-LLT11a的相对表达量 | 第26页 |
| 2 结果与分析 | 第26-29页 |
| 2.1 小RNA样品的质量良好 | 第26-27页 |
| 2.2 RT-qPCR引物特异性良好 | 第27-28页 |
| 2.3 prv-miR-LLT11a在PRV感染PK-15 后呈现出极显著的差异性表达 | 第28-29页 |
| 3 讨论 | 第29-30页 |
| 试验二 prv-miR-LLT11a靶向下调SLA-1 的表达 | 第30-49页 |
| 1 材料和方法 | 第31-36页 |
| 1.1 细胞、毒株、菌株和质粒 | 第31-32页 |
| 1.2 主要试剂 | 第32页 |
| 1.3 主要仪器 | 第32页 |
| 1.4 靶基因预测 | 第32页 |
| 1.5 引物设计 | 第32-33页 |
| 1.6 SLA-13'UTR载体构建 | 第33-35页 |
| 1.6.1 SLA-13'UTR载体构建 | 第33-34页 |
| 1.6.2 SLA-13'UTR mut载体构建 | 第34-35页 |
| 1.7 靶基因验证 | 第35-36页 |
| 1.7.1 细胞铺板及转染 | 第35页 |
| 1.7.2 检测样品制备 | 第35页 |
| 1.7.3 prv-miR-LLT与SLA-1 体外互作验证 | 第35-36页 |
| 1.8 prv-miR-LLT11a对SLA-1 的表达影响 | 第36页 |
| 1.8.1 细胞铺板及转染 | 第36页 |
| 1.8.2 细胞接毒 | 第36页 |
| 1.8.4 蛋白提取与含量测定 | 第36页 |
| 1.8.5 RT-qPCR检测SLA-1 转录表达 | 第36页 |
| 1.8.6 Western Blot检测SLA-1 翻译表达 | 第36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-47页 |
| 2.1 SLA-13'UTR含有prv-miR-LLT11a潜在靶位点 | 第36-37页 |
| 2.2 成功构建SLA-13'UTR载体 | 第37-39页 |
| 2.2.1 成功扩增出SLA-1 mRNA 3'UTR | 第37-38页 |
| 2.2.2 pmirGLO质粒酶切鉴定 | 第38页 |
| 2.2.3 成功构建SLA-13'UTR载体 | 第38-39页 |
| 2.3 成功构建SLA-13'UTR mut载体 | 第39-41页 |
| 2.3.1 成功扩增出SLA-13'UTR突变位点两端片段 | 第39页 |
| 2.3.2 Overlap PCR成功扩增SLA-13'UTR mut | 第39-40页 |
| 2.3.4 成功构建SLA-13'UTR mut载体 | 第40-41页 |
| 2.3.5 prv-miR-LLT11a体外靶向SLA-13'UTR | 第41页 |
| 2.4 prv-miR-LLT11a靶向下调SLA-1 基因表达 | 第41-44页 |
| 2.4.1 引物特异性检测 | 第41-43页 |
| 2.4.2 prv-miR-LLT11a靶向下调SLA-1 基因表达 | 第43-44页 |
| 2.5 不同剂量prv-miR-LLT11a转染对SLA-1 基因转录的影响 | 第44-47页 |
| 2.5.1 引物特异性检测 | 第44-45页 |
| 2.5.2 RT-qPCR和Western Blot结果分析 | 第45-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 试验三 prv-miR-LLT11a过表达对PLC表达及PRV增殖的影响 | 第49-62页 |
| 1 材料和方法 | 第50-52页 |
| 1.1 细胞、毒株 | 第50页 |
| 1.2 主要试剂 | 第50页 |
| 1.3 主要仪器 | 第50页 |
| 1.4 引物设计 | 第50-51页 |
| 1.5 细胞铺板及转染 | 第51页 |
| 1.6 细胞接毒 | 第51页 |
| 1.7 RNA提取及反转录 | 第51页 |
| 1.8 DNA提取 | 第51-52页 |
| 1.9 RT-qPCR检测prv-miR-LLT11a对PLC各组成基因表达的影响 | 第52页 |
| 1.10 病毒蚀斑试验检测prv-miR-LLT11a对PRV增殖的影响 | 第52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-60页 |
| 2.1 引物特异性检测 | 第52-56页 |
| 2.2 prv-miR-LLT11a过表达能够显著抑制TAP1的转录水平 | 第56-60页 |
| 2.3 prv-miR-LLT11a过表达抑制PRV QBA的增殖 | 第60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 全文总结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-74页 |
| ABSTRACT | 第74-76页 |
