| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-22页 |
| ·TGF-β1的免疫学地位 | 第15-17页 |
| ·TGF-β1对免疫细胞的调节作用 | 第15-16页 |
| ·TGF-β1功能异常与免疫疾病 | 第16-17页 |
| ·TGF-β1的细胞信号通路 | 第17-18页 |
| ·TGF-β1特异诱导的转录因子Foxp3 | 第18-21页 |
| ·TGF-β1诱导Foxp3的表达及其免疫学意义 | 第18-20页 |
| ·Foxp3的作用机制 | 第20-21页 |
| ·本论文的主要内容 | 第21页 |
| ·论文的结构安排 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-32页 |
| ·动物模型 | 第22页 |
| ·草鱼 | 第22页 |
| ·小鼠 | 第22页 |
| ·基因克隆 | 第22-25页 |
| ·总RNA的提取 | 第22页 |
| ·模板制备 | 第22-23页 |
| ·cDNA模板制备 | 第22-23页 |
| ·草鱼基因组文库构建 | 第23页 |
| ·PCR | 第23-25页 |
| ·简并PCR | 第23页 |
| ·巢式PCR | 第23-24页 |
| ·半定量PCR | 第24页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第24-25页 |
| ·原核蛋白表达与纯化 | 第25页 |
| ·草鱼白细胞分选与培养 | 第25-26页 |
| ·草鱼白细胞分选 | 第25-26页 |
| ·共培养体系 | 第26页 |
| ·细胞活性检测 | 第26页 |
| ·小鼠单克隆抗体制备 | 第26-27页 |
| ·动物免疫 | 第26-27页 |
| ·细胞融合 | 第27页 |
| ·抗体纯化 | 第27页 |
| ·免疫印迹法 | 第27-28页 |
| ·竞争结合酶联免疫分析 | 第28页 |
| ·细胞染色 | 第28-30页 |
| ·细胞染色 | 第28-29页 |
| ·细胞免疫组织化学 | 第29-30页 |
| ·RNA干扰(RNA interference，RNAi) | 第30页 |
| ·细胞转染 | 第30页 |
| ·HEK293细胞株RNAi | 第30页 |
| ·草鱼原代头肾白细胞RNAi | 第30页 |
| ·嗜水气单胞菌嗜水亚种活体感染实验 | 第30-31页 |
| ·统计学分析 | 第31-32页 |
| 第三章 草鱼TGF-β1在不同细胞亚群中的双向免疫调节作用 | 第32-55页 |
| ·概述 | 第32-33页 |
| ·实验材料与方法 | 第33-35页 |
| ·动物模型 | 第33页 |
| ·草鱼tgfβ1和tβrⅡ基因的克隆 | 第33-34页 |
| ·草鱼tgfβ1的组织分布 | 第34页 |
| ·草鱼 TGF-β1与TβR Ⅱ的原核表达 | 第34页 |
| ·受体因子竞争结合酶联免疫分析 | 第34页 |
| ·草鱼TGF-β1小鼠单克隆抗体的制备与验证 | 第34页 |
| ·草鱼TGF-β1对白细胞的调节作用 | 第34页 |
| ·基因表达 | 第34页 |
| ·细胞染色 | 第34页 |
| ·统计学分析 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-52页 |
| ·草鱼tgfβ1的克隆与组织分布 | 第35-37页 |
| ·草鱼TGF-β1上调外周血白细胞活性和免疫相关基因的表达 | 第37-44页 |
| ·草鱼TGF-β1的重组表达及其受体特异性的验证 | 第37-40页 |
| ·草鱼TGF-β1单克隆抗体特异性的鉴定 | 第40-41页 |
| ·草鱼TGF-β1上调外周血白细胞的活性 | 第41-42页 |
| ·草鱼TGF-β1上调外周血白细胞中免疫相关基因的表达 | 第42-44页 |
| ·草鱼TGF-β1下调头肾白细胞活性与免疫相关基因的表达 | 第44-46页 |
| ·草鱼TGF-β1下调头肾白细胞的活性 | 第44-45页 |
| ·草鱼TGF-β1下调头肾白细胞中免疫相关基因的表达 | 第45-46页 |
| ·外周血与头肾白细胞亚群的细胞形态学特征分析 | 第46-48页 |
| ·外周血与头肾白细胞亚群免疫活性的差异 | 第48-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-55页 |
| 第四章 草鱼TGF-β1双向免疫调节功能的受体信号调控 | 第55-70页 |
| ·概述 | 第55页 |
| ·实验材料与方法 | 第55-57页 |
| ·动物模型 | 第55-56页 |
| ·草鱼白细胞亚群的分选与培养 | 第56页 |
| ·基因表达 | 第56页 |
| ·草鱼alk5基因的克隆 | 第56页 |
| ·草鱼alk5的组织分布 | 第56页 |
| ·草鱼ALK5兔多克隆抗体的验证 | 第56页 |
| ·草鱼ALK5的表达 | 第56页 |
| ·细胞染色与免疫组织化学 | 第56页 |
| ·统计学分析 | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-68页 |
| ·草鱼TGF-β1通过Ⅰ型受体ALK5发挥免疫调节功能 | 第57-59页 |
| ·草鱼 ALK5 的克隆与组织分布 | 第59-62页 |
| ·草鱼TGF-β1信号的自调控 | 第62-68页 |
| ·草鱼TGF-β1下调白细胞中ALK5的基因表达和蛋白水平 | 第62-65页 |
| ·草鱼TGF-β1下调白细胞中的ALK5阳性细胞数量 | 第65-66页 |
| ·草鱼TGF-β1信号的“触发”传递 | 第66-68页 |
| ·讨论 | 第68-69页 |
| ·本章小结 | 第69-70页 |
| 第五章 草鱼TGF-β1特异转录因子的分离和鉴定 | 第70-98页 |
| ·概述 | 第70-72页 |
| ·实验材料与方法 | 第72-73页 |
| ·动物模型 | 第72页 |
| ·草鱼foxp亚家族基因的克隆 | 第72页 |
| ·草鱼foxp亚家族基因的组织分布 | 第72页 |
| ·草鱼白细胞亚群的分选与培养 | 第72页 |
| ·基因表达 | 第72页 |
| ·活体感染 | 第72页 |
| ·草鱼FOXP3小鼠单克隆抗体的制备与验证 | 第72-73页 |
| ·草鱼Foxp3的表达 | 第73页 |
| ·草鱼foxp3启动子的克隆 | 第73页 |
| ·原代细胞RNAi | 第73页 |
| ·统计学分析 | 第73页 |
| ·结果与分析 | 第73-94页 |
| ·草鱼Foxp亚家族成员的基因克隆与组织分布 | 第73-82页 |
| ·草鱼Foxp亚家族成员参与免疫反应的鉴定 | 第82-85页 |
| ·草鱼Foxp1/2 基因在活化白细胞中的表达 | 第82-85页 |
| ·草鱼体内感染抑制模型中Foxp3的表达 | 第85-88页 |
| ·草鱼体内感染模型 | 第85-86页 |
| ·感染抑制模型中Foxp3的表达 | 第86-88页 |
| ·草鱼TGF-β1上调白细胞中Foxp3基因的表达 | 第88-91页 |
| ·草鱼TGF-β1上调头肾白细胞亚群中的Foxp3蛋白表达 | 第91-92页 |
| ·TGF-β1通过草鱼Foxp3发挥免疫调节作用 | 第92-94页 |
| ·讨论 | 第94-96页 |
| ·本章小结 | 第96-98页 |
| 第六章 草鱼 TGF-β1诱导的Foxp3阳性细胞的免疫功能与调节机制 | 第98-107页 |
| ·概述 | 第98页 |
| ·实验材料与方法 | 第98-99页 |
| ·动物模型 | 第98页 |
| ·草鱼白细胞亚群的分选与培养 | 第98-99页 |
| ·细胞染色与免疫组织化学 | 第99页 |
| ·细胞活性检测 | 第99页 |
| ·竞争结合酶联免疫分析 | 第99页 |
| ·基因表达 | 第99页 |
| ·统计学分析 | 第99页 |
| ·结果与分析 | 第99-105页 |
| ·草鱼TGF-β1诱导的Foxp3阳性细胞的免疫功能 | 第99-102页 |
| ·草鱼TGF-β1诱导的Foxp3阳性细胞的调节作用机制 | 第102-105页 |
| ·讨论 | 第105-106页 |
| ·本章小结 | 第106-107页 |
| 第七章 结论 | 第107-109页 |
| ·本论文的主要贡献 | 第107页 |
| ·下一步工作的展望 | 第107-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-125页 |
| 攻读博士期间取得的成果 | 第125-128页 |
