| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-16页 |
| ·干扰素概述 | 第10页 |
| ·干扰素的分类和特点 | 第10页 |
| ·IFN-α的结构及生物学活性 | 第10-11页 |
| ·干扰素抗病毒活性的作用机制 | 第11-12页 |
| ·犬α干扰素的研究概况 | 第12-13页 |
| ·内含肽介导的大肠杆菌表达系统 | 第13-14页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第13页 |
| ·提高重组蛋白可溶性表达的方法 | 第13-14页 |
| ·内含肽的应用 | 第14页 |
| ·利用毕赤酵母表达系统表达外源蛋白 | 第14-15页 |
| ·研究的目的与意义 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-30页 |
| ·材料 | 第16-17页 |
| ·质粒、宿主菌、病毒 | 第16页 |
| ·细胞、培养基 | 第16页 |
| ·酶和生化试剂 | 第16页 |
| ·主要仪器和设备 | 第16-17页 |
| ·方法 | 第17-30页 |
| ·犬α干扰素多克隆抗体的制备 | 第17-20页 |
| ·内含肽-融合标签介导的犬α干扰素在大肠杆菌中的高效可溶性表达 | 第20-23页 |
| ·犬α干扰素在毕赤酵母中的分泌表达 | 第23-29页 |
| ·发酵工艺的初步研究 | 第29页 |
| ·表达的犬α干扰素与某品牌犬α干扰素的比较 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-49页 |
| ·犬α干扰素多克隆抗体的制备 | 第30-33页 |
| ·在犬基因组中PCR获得CaIFN-α的序列 | 第30页 |
| ·重组质粒pEASY-Blunt-Simple-CaIFN-α的PCR鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组质粒pGEX-6p-1-CaIFN-α的构建 | 第31-32页 |
| ·重组蛋白的表达及多抗血清的制备 | 第32-33页 |
| ·内含肽-融合标签介导的在大肠杆菌中的高效可溶性表达 | 第33-38页 |
| ·重组表达载体pMAL-c2X-SDI-CaIFN-α的构建 | 第33-35页 |
| ·融合蛋白的表达及鉴定 | 第35-37页 |
| ·CaIFN-α抗病毒活性分析 | 第37-38页 |
| ·犬α干扰素在毕赤酵母中的分泌表达 | 第38-45页 |
| ·pPICZαA-CaIFN-α酵母表达载体的构建 | 第38-40页 |
| ·重组酵母的鉴定 | 第40-41页 |
| ·CaIFN-α在毕赤酵母中的表达及鉴定 | 第41-43页 |
| ·用Dot-ELISA(免疫酶斑点技术)比较9株重组酵母的表达量 | 第43页 |
| ·普通摇瓶与挡板摇瓶表达犬α干扰素的比较 | 第43-44页 |
| ·重组CaIFN-α抗病毒活性分析 | 第44-45页 |
| ·重组酵母在发酵罐中的表达 | 第45-47页 |
| ·不同时间点酵母菌体湿重 | 第45页 |
| ·间接ELISA法检测重组蛋白的表达 | 第45-46页 |
| ·SDS-PAGE检测重组蛋白的表达及蛋白表达量 | 第46-47页 |
| ·发酵罐培养毕赤酵母表达重组蛋白的抗病毒活性 | 第47页 |
| ·表达的犬α干扰素与市场上某品牌犬α干扰素的比较 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| ·在大肠杆菌中影响外源蛋白进行可溶性表达的因素 | 第49页 |
| ·内含肽标签对蛋白可溶性的影响 | 第49页 |
| ·表达载体对蛋白可溶性的影响 | 第49页 |
| ·温度对蛋白可溶性的影响 | 第49页 |
| ·毕赤酵母的表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·毕赤酵母对表达的外源蛋白的糖基化影响 | 第50页 |
| ·毕赤酵母中提高外源蛋白表达量的策略 | 第50-51页 |
| ·CaIFN-α活性的测定 | 第51页 |
| ·发酵工艺的初步研究 | 第51-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第57页 |
