| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩略表 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-22页 |
| ·叶酸的化学结构与生理功能 | 第12页 |
| ·叶酸与人体健康 | 第12-14页 |
| ·贫血 | 第12-13页 |
| ·神经系统疾病(NTD) | 第13页 |
| ·心血管疾病 | 第13页 |
| ·癌症 | 第13-14页 |
| ·人群叶酸营养水平监测 | 第14-16页 |
| ·我国人群叶酸营养状况 | 第14-15页 |
| ·食物中叶酸含量 | 第15页 |
| ·饮食与叶酸营养水平 | 第15页 |
| ·叶酸食品强化 | 第15-16页 |
| ·作物叶酸代谢工程 | 第16-21页 |
| ·植物中叶酸合成途径 | 第16-17页 |
| ·模式植物叶酸代谢工程 | 第17-18页 |
| ·番茄叶酸代谢工程 | 第18-19页 |
| ·水稻叶酸代谢工程 | 第19页 |
| ·玉米叶酸代谢工程 | 第19-20页 |
| ·其他叶酸代谢工程 | 第20-21页 |
| ·研究背景,意义和内容 | 第21-22页 |
| 第二章 利用PTR1基因提高烟草叶酸含量的研究 | 第22-35页 |
| 1 实验材料 | 第22-23页 |
| ·实验样品 | 第22页 |
| ·工具酶 | 第22页 |
| ·试剂盒 | 第22页 |
| ·分子量标准 | 第22页 |
| ·测序及引物合成 | 第22页 |
| ·化学试剂 | 第22-23页 |
| 2 实验方法 | 第23-30页 |
| ·基因的分离、载体的构建和农杆菌转化 | 第23-25页 |
| ·菌株、载体、引物设计 | 第23页 |
| ·PTR1和MT-PTR1基因的分离 | 第23-24页 |
| ·pET3a-PTR1质粒DNA的提取 | 第24页 |
| ·PCR扩增 | 第24页 |
| ·目的片段回收 | 第24页 |
| ·PCR产物与pEASY-Blunt的重组 | 第24-25页 |
| ·植物双元表达载体的构建 | 第25页 |
| ·烟草的转化 | 第25-27页 |
| ·烟草无菌苗培养 | 第25页 |
| ·烟草转化 | 第25-26页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第26页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第26-27页 |
| ·半定量RT-PCR | 第27-28页 |
| ·RNA的提取 | 第27页 |
| ·RT-PCR | 第27-28页 |
| ·叶酸含量测定 | 第28-30页 |
| ·叶酸的提取 | 第28页 |
| ·微生物法测定 | 第28-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-35页 |
| ·PTR1基因的过表达载体构建 | 第30-32页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第32页 |
| ·转基因烟草在转录水平上的检测 | 第32-33页 |
| ·转基因植株的叶酸含量分析 | 第33-35页 |
| 第三章 利用GTPCHI基因提高拟南芥叶酸含量的研究 | 第35-49页 |
| 1 实验材料 | 第35-36页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·工具酶 | 第35页 |
| ·测序及引物合成 | 第35页 |
| ·试剂盒 | 第35页 |
| ·分子量标准 | 第35页 |
| ·化学试剂 | 第35-36页 |
| 2 实验方法 | 第36-42页 |
| ·基因的分离、载体的构建和农杆菌转化 | 第36-41页 |
| ·菌株、载体、引物设计 | 第36-37页 |
| ·Trizol法提取烟草RNA | 第37页 |
| ·RT-PCR | 第37-38页 |
| ·大豆GTPCHI基因的克隆 | 第38页 |
| ·PCR产物与pEASY-Blunt的重组 | 第38页 |
| ·RACE(Rapid Amplification cDNA End) | 第38-40页 |
| ·RACE所用引物及接头序列 | 第38-39页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第39页 |
| ·扩增5’端cDNA | 第39-40页 |
| ·PCR产物与pEASY-Blunt的重组 | 第40页 |
| ·扩增3’端cDNA | 第40页 |
| ·PCR产物与pEASY-Blunt的重组 | 第40页 |
| ·克隆到PHP20754 | 第40-41页 |
| ·克隆到pH2GW7 | 第41页 |
| ·中间载体的构建 | 第41页 |
| ·表达载体的构建 | 第41页 |
| ·Floral Dipping法转化拟南芥 | 第41页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-49页 |
| ·大豆GTPCHI的同源基因和蛋白序列分析 | 第42-44页 |
| ·RACE扩增大豆GTPCHI cDNA的全长 | 第44页 |
| ·RT-PCR检测大豆GTPCHI基因不同组织器官的表达模式 | 第44-45页 |
| ·胚乳特异性植物表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·过表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第47-49页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 攻读学位期间公开发表的论文 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
