| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-37页 |
| ·植物细菌性青枯病 | 第13-19页 |
| ·植物细菌性青枯病的危害 | 第13-14页 |
| ·青枯菌的致病过程 | 第14页 |
| ·青枯菌的毒性因子及分泌 | 第14-18页 |
| ·青枯菌致病基因表达的信号调控 | 第18-19页 |
| ·植物病原细菌的群体感应及其调节机制 | 第19-25页 |
| ·植物病原细菌的群体感应 | 第19-20页 |
| ·植物病原细菌的信号分子 | 第20-22页 |
| ·植物病原细菌的群体感应调节机制 | 第22-23页 |
| ·重要植物病原细菌群体感应调控致病性的机制 | 第23-25页 |
| ·植物病原细菌的群体猝灭 | 第25-33页 |
| ·阻断AHL信号分子的合成 | 第25-26页 |
| ·AHL的类似物作为拮抗物 | 第26-28页 |
| ·AHL信号分子的酶解 | 第28-33页 |
| ·植物病原细菌群体猝灭的利用 | 第33-35页 |
| ·转基因植物产生AHL信号分子 | 第33页 |
| ·生防菌提高植物的抗病性 | 第33-34页 |
| ·AHL-内酯酶转基因植物的培育 | 第34-35页 |
| ·本研究的目的意义和技术路线 | 第35-37页 |
| ·研究的目的和意义 | 第35-36页 |
| ·技术路线 | 第36-37页 |
| 第二章 青枯菌aac基因的克隆及原核表达产物的功能分析 | 第37-58页 |
| ·实验材料 | 第37-38页 |
| ·菌株和质粒 | 第37页 |
| ·生化试剂 | 第37页 |
| ·培养基和菌株培养条件 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-49页 |
| ·青枯菌基因组DNA的制备 | 第38-39页 |
| ·高GC含量aac基因PCR扩增条件的优化 | 第39-41页 |
| ·aac基因的制备 | 第41-43页 |
| ·pET-5a载体双酶切的制备 | 第43-44页 |
| ·pET-aac原核表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·重组质粒的提取与酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·目的蛋白的表达及检测 | 第46-47页 |
| ·原核表达条件优化 | 第47-48页 |
| ·AAC蛋白对病菌的致病作用的影响 | 第48页 |
| ·AAC蛋白降解OHHL活性的测定 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-55页 |
| ·青枯菌基因组DNA的制备 | 第49页 |
| ·高GC 含量aac基因的PCR扩增条件的优化 | 第49-51页 |
| ·aac基因原核表达载体的构建及序列分析 | 第51-53页 |
| ·aac基因的诱导表达 | 第53页 |
| ·原核表达条件优化 | 第53-54页 |
| ·AAC融合蛋白活性测定 | 第54-55页 |
| ·AAC融合蛋白降解OHHL活性的测定 | 第55页 |
| ·讨论 | 第55-58页 |
| 第三章 青枯菌aac基因突变株的构建及其致病性分析 | 第58-67页 |
| ·实验材料 | 第58-59页 |
| ·菌株和质粒 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58-59页 |
| ·实验方法 | 第59-61页 |
| ·aac_(1245-1768) 基因片段PCR扩增 | 第59页 |
| ·庆大霉素基因的PCR扩增 | 第59-60页 |
| ·aac基因重组自杀质粒pDS-aac’-Gm的构建及鉴定 | 第60页 |
| ·青枯菌GMI 1000 感受态细胞的制备及电转化 | 第60-61页 |
| ·aac基因突变菌株的筛选与鉴定 | 第61页 |
| ·突变菌株和野生型菌株致病性的测定 | 第61页 |
| ·结果与分析 | 第61-64页 |
| ·aac_(1245-1768) 基因片段的克隆 | 第61-62页 |
| ·庆大霉素基因的克隆及重组质粒pGEM-aac’::Gm的构建及鉴定 | 第62页 |
| ·自杀质粒pDS-aac’-Gm的构建及鉴定 | 第62页 |
| ·aac基因突变菌株的筛选与鉴定 | 第62-63页 |
| ·突变菌株和野生型菌株致病性的测定 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-67页 |
| 第四章 抗青枯病转aac基因烟草和番茄的培育 | 第67-101页 |
| ·试验材料 | 第67-69页 |
| ·菌种和质粒 | 第67页 |
| ·植物材料 | 第67-68页 |
| ·生化试剂 | 第68页 |
| ·培养基 | 第68-69页 |
| ·实验方法 | 第69-83页 |
| ·高效植物表达载体的构建 | 第69-75页 |
| ·农杆菌介导的叶盘法转化烟草 | 第75页 |
| ·番茄离体再生体系的建立及优化 | 第75-76页 |
| ·农杆菌介导的叶盘法转化番茄 | 第76-77页 |
| ·转化植株的分子检测 | 第77-83页 |
| ·转基因烟草的抗病性分析 | 第83页 |
| ·结果和分析 | 第83-98页 |
| ·高效植物表达载体的构建 | 第83-89页 |
| ·烟草转化植株的获得 | 第89-90页 |
| ·番茄再生体系的建立及优化 | 第90-92页 |
| ·番茄转化植株的获得 | 第92-93页 |
| ·转基因烟草的分子检测 | 第93-95页 |
| ·转基因番茄的分子检测 | 第95-96页 |
| ·转基因烟草的抗病性检测 | 第96-97页 |
| ·转基因番茄的抗病性检测 | 第97-98页 |
| ·讨论 | 第98-101页 |
| 第五章 青枯菌毒性蛋白分泌系统Gsp蛋白互作分析 | 第101-122页 |
| ·试验材料 | 第101-102页 |
| ·菌株和质粒 | 第101-102页 |
| ·生化试剂 | 第102页 |
| ·培养基 | 第102页 |
| ·实验方法 | 第102-113页 |
| ·gspC、E、L、M基因原核表达载体的构建 | 第102-105页 |
| ·目的蛋白的表达及检测 | 第105页 |
| ·原核表达条件优化 | 第105-106页 |
| ·蛋白质疏水性和跨膜区分析 | 第106页 |
| ·包涵体的表达和初步纯化 | 第106页 |
| ·透析复性法 | 第106-107页 |
| ·CA refolding 试剂盒复性 | 第107-108页 |
| ·氧化稀释复性及超滤浓缩蛋白法 | 第108-109页 |
| ·融合蛋白质的纯化 | 第109-110页 |
| ·6×His-GspL包涵体蛋白的柱上复性 | 第110-111页 |
| ·体外沉降试验 | 第111-112页 |
| ·Western Blot 方法 | 第112-113页 |
| ·结果与分析 | 第113-119页 |
| ·gspC、E、L、M基因原核表达载体的构建 | 第113-114页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第114页 |
| ·原核表达条件的优化 | 第114-115页 |
| ·Gsp 蛋白疏水性分析及跨膜区分析 | 第115-116页 |
| ·包涵体的初步纯化 | 第116页 |
| ·蛋白的复性 | 第116-117页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第117页 |
| ·柱上复性 | 第117-118页 |
| ·Pull-down蛋白结合 | 第118-119页 |
| ·讨论 | 第119-122页 |
| 第六章 全文结论 | 第122-123页 |
| 本研究得到以下结论 | 第122页 |
| 下一步工作展望 | 第122-123页 |
| 参考文献 | 第123-139页 |
| 致谢 | 第139-140页 |
| 作者简历 | 第140-141页 |
