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口蹄疫病毒泛亚型O/CHINA/99株(全长、缺失和置换)cDNA分子克隆构建和感染性鉴定

摘要第1-6页
Abstract第6-11页
第一章 绪论第11-30页
   ·研究背景、目的和意义第11-12页
   ·国内外研究现状第12-18页
     ·FMDV 5'UTR 的VPg第13页
     ·FMDV 5'UTR 的假结节第13页
     ·IRES在病毒翻译中的作用第13-15页
     ·3'UTR 的功能及其与高级结构的关系第15-16页
       ·3'UTR 对基因组复制的调控第15-16页
       ·3'UTR对基因组翻译的调控第16页
       ·3'UTR与蛋白质因子间复杂的相互作用第16页
     ·影响FMDV宿主嗜性的基因第16-18页
       ·第17页
       ·第17页
       ·第17-18页
   ·RNA 病毒的反向遗传学研究第18-29页
     ·概述第18-19页
     ·早期的反向遗传学的研究第19-20页
     ·病毒反向遗传操作技术的建立第20-23页
       ·构建病毒基因组全长cDNA克隆第20-21页
       ·感染性转录物的产生第21-22页
       ·从cDNA克隆拯救感染性病毒第22-23页
     ·正链RNA 病毒的反向遗传学操作第23-24页
     ·负链RNA 病毒第24-25页
     ·影响构建感染性克隆的限制性因素第25-27页
     ·感染性克隆的产生与鉴定第27页
     ·病毒基因组功能的研究第27页
     ·新型疫苗的研究第27-28页
     ·基因治疗第28-29页
   ·结语第29页
   ·研究内容和方法第29-30页
第二章 口蹄疫病毒泛亚型0/CHINA/99 株全长cDNA 分子克隆构建和感染性鉴定第30-37页
   ·材料与方法第30-32页
     ·材料第30页
     ·方法第30-32页
       ·引物的设计与合成第30页
       ·全长cDNA 的克隆和构建第30-32页
       ·FMDV O/CHINA/99 株基因组全序列的扩增第32页
   ·结果第32-35页
     ·感染性克隆载体的鉴定第32-33页
     ·体外转录物RNA的制备第33页
     ·转染BHK-21细胞第33-34页
     ·乳鼠实验结果第34-35页
   ·讨论第35-37页
第三章 口蹄疫病毒泛亚型 0/CHINA/99 缺失毒株全长 cDNA 分子的克隆构建和感染性鉴定第37-45页
   ·材料与方法第37-39页
     ·毒株和工程菌第37页
     ·主要工具酶及试剂盒第37-38页
     ·5'端片设计与合成第38页
     ·FMDV O/CHINA/99株基因组全序列的扩增第38页
     ·全长cDNA的克隆和构建第38-39页
   ·结果第39-43页
     ·5'端缺失后序列的鉴定第39-40页
     ·全长cDNA 构建和鉴定第40页
     ·体外转录物 RNA 的制备第40-41页
     ·转染BHK-21 细胞第41-42页
     ·乳鼠试验结果第42页
     ·功能未知区序列的空间结构第42-43页
     ·5'UTR序列的比对第43页
   ·讨论第43-45页
第四章 FMDV型内嵌合病毒TAW97/CHINA 99的构建和感染性鉴定第45-56页
   ·材料与方法第45-47页
     ·O/CHINA/99 感染性cDNA 克隆第45页
     ·主要工具酶及试剂盒第45-46页
     ·突变序列的设计与合成第46页
     ·O/CHINA/99 突变毒株全长cDNA 的克隆和构建技术路线(图1)第46-47页
   ·结果第47-50页
     ·嵌合重组质粒pOKTAW97/CHINA99 的鉴定结果第47页
     ·线性化全长cDNA 的获得第47-48页
     ·体外转录物RNA的制备第48页
       ·体外转录第48页
       ·转录产物的纯化第48页
     ·转染BHK-21细胞第48-49页
       ·细胞培养及处理第48页
       ·制备RNA-阳离子脂质体试剂复合物第48-49页
       ·转然细胞第49页
     ·乳鼠实验结果第49-50页
   ·IRES的空间结构及真核起始因子第50-54页
     ·IRES空间结构第50-51页
     ·FMDV翻译所涉及的细胞因子第51-54页
   ·讨论第54-56页
第五章 研究结论第56-57页
参考文献第57-65页
致谢第65-66页
作者简历第66页

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