| 目录 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 缩略语及其英(拉)汉对照 | 第15-18页 |
| 引言 | 第18-20页 |
| 上篇 文献综述 | 第20-43页 |
| 第一章 植物病原细菌hrp基因簇和致病岛 | 第20-26页 |
| ·概述 | 第20页 |
| ·hrp基因的发现及分布 | 第20-21页 |
| ·hrp基因的功能及hrp基因簇 | 第21-23页 |
| ·植物病原细菌的致病岛 | 第23-26页 |
| 第二章 病原细菌Ⅲ型泌出系统研究进展 | 第26-36页 |
| ·概述 | 第26-28页 |
| ·Ⅲ型泌出系统的遗传组成 | 第28-31页 |
| ·Ⅲ型泌出系统的底物 | 第31页 |
| ·植物病原细菌的Harpin蛋白 | 第31-33页 |
| ·Ⅲ型泌出系统的效应蛋白 | 第33-36页 |
| 第三章 植物病原细菌Ⅲ型泌出系统的调节机制 | 第36-39页 |
| ·概述 | 第36页 |
| ·hrp基因表达的调节 | 第36-37页 |
| ·效应蛋白分泌的调节 | 第37-39页 |
| 第四章 细菌的裂解转糖基酶研究现状 | 第39-43页 |
| ·裂解转糖基酶的概念 | 第39页 |
| ·细菌的裂解转糖基酶分类 | 第39页 |
| ·细菌的裂解转糖基酶的结构及其作用机制 | 第39-41页 |
| ·裂解转糖基酶与细菌运输系统的关系 | 第41-43页 |
| 下篇 研究内容 | 第43-88页 |
| 第五章 水稻黄单胞菌hpa2基因的保守性 | 第43-60页 |
| 1 材料和方法 | 第44-53页 |
| ·材料 | 第44-46页 |
| ·菌株和质粒 | 第44-45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·培养基 | 第45-46页 |
| ·核酸电泳缓冲液 | 第46页 |
| ·主要仪器设备 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-53页 |
| ·水稻黄单胞菌基因DNA的提取 | 第46-49页 |
| ·培养液的准备 | 第46-47页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第47-48页 |
| ·基因组DNA的检测 | 第48-49页 |
| ·目的DNA扩增引物的设计与合成 | 第49页 |
| ·目的DNA的扩增及其产物纯化 | 第49-50页 |
| ·目的DNA的PCR扩增 | 第49页 |
| ·PCR扩增产物的纯化 | 第49-50页 |
| ·PCR扩增产物的克隆 | 第50-51页 |
| ·扩增产物DNA片段与克隆载体的连接 | 第50页 |
| ·E.coli DH5α感受态的制备 | 第50-51页 |
| ·连接产物的热激转化 | 第51页 |
| ·目的基因hpa2的检测 | 第51-52页 |
| ·质粒的提取 | 第51-52页 |
| ·质粒的酶切 | 第52页 |
| ·克隆DNA片段的测序 | 第52页 |
| ·Hpa2氨基酸分析的方法 | 第52-53页 |
| 2 实验结果 | 第53-58页 |
| ·hpa2基因保守性 | 第53-55页 |
| ·hpa2基因密码子简并性 | 第55页 |
| ·Hpa2蛋白总酸碱催化残基含量分析 | 第55页 |
| ·Hpa2氨基酸序列分析 | 第55-58页 |
| 3 讨论 | 第58-60页 |
| 第六章 水稻黄单胞PXO99菌株Hpa2蛋白活性 | 第60-75页 |
| 1 材料和方法 | 第61-69页 |
| ·材料 | 第61-65页 |
| ·菌株和质粒 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61页 |
| ·培养基 | 第61页 |
| ·蛋白提取缓冲液 | 第61-62页 |
| ·蛋白电泳缓冲液 | 第62-64页 |
| ·蛋白电泳胶染色液 | 第64页 |
| ·蛋白电泳胶脱色液 | 第64页 |
| ·蛋白溶菌反应缓冲液 | 第64-65页 |
| ·主要仪器设备 | 第65页 |
| ·方法 | 第65-69页 |
| ·hpa2基因表达载体的构建 | 第65-67页 |
| ·564 bp ORF引物的设计与合成 | 第65-66页 |
| ·目的DNA 564 bp的PCR扩增 | 第66页 |
| ·扩增片段564 bp的克隆 | 第66页 |
| ·目的DNA片段564 bp连入表达载体 | 第66-67页 |
| ·目的DNA片段的酶切及纯化 | 第66页 |
| ·目的DNA片段连接入表达载体 | 第66页 |
| ·E.coli BL21(DE3)菌株感受态的制备 | 第66-67页 |
| ·连接产物的克隆 | 第67页 |
| ·Hpa2蛋白表达及其检测 | 第67页 |
| ·Hpa2蛋白的提取 | 第67页 |
| ·Hpa2蛋白SDS-PAGE | 第67页 |
| ·Hpa2蛋白的定量测定 | 第67页 |
| ·Hpa2蛋白分泌的测定 | 第67-68页 |
| ·Hpa2蛋白溶菌的测定 | 第68-69页 |
| ·Hpa2蛋白对细菌细胞壁裂解的观察 | 第69页 |
| 2 实验结果 | 第69-70页 |
| ·Hpa2蛋白的基本特性 | 第69-70页 |
| ·Hpa2蛋白的溶菌效果 | 第70页 |
| 3 讨论 | 第70-75页 |
| 第七章 hpa2基因在病原与植物互作中的作用 | 第75-88页 |
| 1 材料和方法 | 第76-83页 |
| ·材料 | 第76页 |
| ·菌株和质粒 | 第76页 |
| ·主要试剂 | 第76页 |
| ·培养基 | 第76页 |
| ·核酸电泳缓冲液 | 第76页 |
| ·主要仪器 | 第76页 |
| ·方法 | 第76-83页 |
| ·Xoo PXO99菌株hpa2基因突变载体的克隆 | 第76-78页 |
| ·设计引物 | 第76-77页 |
| ·目的片段464 bp的PCR扩增 | 第77页 |
| ·扩增片段464 bp的克隆 | 第77页 |
| ·自杀载体的构建 | 第77-78页 |
| ·DNA的酶切及纯化 | 第77页 |
| ·464 bp DNA片段连接入自杀载体pKNOCK-Cm | 第77-78页 |
| ·E.coli S17-1 λpir菌株感受态的制备 | 第78页 |
| ·连接产物转化入自杀载体 | 第78页 |
| ·hpa2基因突变体的筛选 | 第78-80页 |
| ·PXO99~A菌株感受态细胞的制备 | 第78-79页 |
| ·PXO99~A菌株感受态细胞电转化 | 第79-80页 |
| ·hpa2基因突变体的分子检测 | 第80页 |
| ·hpa2基因全长712 bp的克隆 | 第80页 |
| ·引物的设计与合成 | 第80页 |
| ·目的片段PCR扩增 | 第80页 |
| ·扩增产物的克隆 | 第80页 |
| ·hpa2基因互补载体的构建 | 第80-81页 |
| ·DNA的酶切及纯化 | 第81页 |
| ·目的DNA片段连接入互补载体 | 第81页 |
| ·构建载体的转化 | 第81页 |
| ·hpa2基因互补转化子的筛选 | 第81页 |
| ·互补载体质粒提取 | 第81页 |
| ·互补转化子的筛选 | 第81页 |
| ·突变菌株接种植物体分析 | 第81-83页 |
| ·菌株的培养 | 第81-82页 |
| ·植物的准备 | 第82页 |
| ·接种植物 | 第82页 |
| ·细菌繁殖的记数 | 第82-83页 |
| 2 实验结果 | 第83-84页 |
| ·突变菌株464-16的获得 | 第83页 |
| ·互补菌株712-22的获得 | 第83页 |
| ·hpa2基因在寄主植物上引起致病性 | 第83-84页 |
| ·hpa2基因在非寄主植物上产生过敏性反应 | 第84页 |
| 3 讨论 | 第84-88页 |
| 全文总结 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-102页 |
| 附录一 水稻黄单胞PXO99菌株hrp基因簇的克隆及其hrf基因突变载体的构建 | 第102-115页 |
| 1 材料和方法 | 第103-106页 |
| ·材料 | 第103-104页 |
| ·菌株和质粒 | 第103页 |
| ·主要试剂 | 第103页 |
| ·培养基 | 第103页 |
| ·核酸电泳缓冲液 | 第103-104页 |
| ·主要仪器设备 | 第104页 |
| ·方法 | 第104-106页 |
| ·水稻黄单胞菌株Xoo PXO99基因组DNA的提取 | 第104页 |
| ·培养液的准备 | 第104页 |
| ·基因DNA的提取 | 第104页 |
| ·基因DNA的检测 | 第104页 |
| ·目的DNA扩增引物的设计与合成 | 第104页 |
| ·目的DNA的扩增及其产物纯化 | 第104页 |
| ·目的DNA的PCR扩增 | 第104页 |
| ·PCR扩增产物的纯化 | 第104页 |
| ·PCR扩增产物的克隆 | 第104-105页 |
| ·扩增产物DNA片段与克隆载体的连接 | 第104页 |
| ·E.coli DH5α感受态的制备 | 第104页 |
| ·连接产物的热激转化 | 第104-105页 |
| ·目的DNA片段的检测 | 第105页 |
| ·质粒的提取 | 第105页 |
| ·质粒的酶切 | 第105页 |
| ·克隆DNA片段的测序 | 第105页 |
| ·hrf基因旁侧同源序列扩增引物的设计与合成 | 第105页 |
| ·hrf基因旁侧同源序列产物扩增、纯化、克隆及其检测 | 第105页 |
| ·标记交换基因cat的制备 | 第105页 |
| ·hrf基因旁侧同源序列cat基因连入载体pKNG101 | 第105页 |
| ·突变载体的检测 | 第105-106页 |
| 2 实验结果 | 第106-107页 |
| ·hrp3223的序列分析 | 第106-107页 |
| ·hrf基因突变载体的构建 | 第107页 |
| 3 讨论 | 第107-115页 |
| 附录二 本论文涉及质粒的图谱及其特性 | 第115-121页 |
| 附录三 主要参考网站 | 第121-122页 |
| 附录四 登录NCBI的序列 | 第122-124页 |
| 攻读博士学位期间发表论文 | 第124-126页 |
| 致谢 | 第126页 |
