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多重PCR检测禽致病性大肠杆菌毒力基因方法的建立及应用

中文摘要第1-7页
英文摘要第7-11页
中英文对照表第11-12页
文献综述第12-18页
1 引言第18-20页
2 材料与方法第20-26页
   ·实验材料第20-21页
     ·实验菌株第20页
     ·培养基及规试剂第20页
     ·分子生物学试剂第20页
     ·主要仪器第20-21页
   ·实验方法第21-26页
     ·APEC中papC、iucD、irp2、tsh、iss单基因PCR扩增第21-23页
       ·大肠杆菌培养与基因组DNA的提取第21-22页
       ·引物设计第22-23页
       ·papC、iucD、irp2、tsh、iss单基因PCR扩增体系第23页
       ·papC、iucD、irp2、tsh、iss单基因PCR反应参数第23页
       ·papC、iucD、irp2、tsh、iss PCR产物的鉴定第23页
         ·琼脂糖凝胶电泳鉴定第23页
         ·papC、iucD、irp2、tsh、iss PCR产物测序鉴定第23页
     ·papC、iucD、irp2、tsh、iss多重PCR条件的优化第23-25页
       ·引物浓度的优化第23页
       ·镁离子浓度的优化第23-24页
       ·Taq酶量的优化第24页
       ·退火温度的优化第24页
       ·延伸时间的优化第24-25页
       ·循环次数的优化第25页
       ·DNA提取方法的比较第25页
     ·多重PCR敏感性实验第25页
     ·多重PCR特异性实验第25页
     ·APEC安徽分离株毒力基因的多重PCR检测第25-26页
3 结果与分析第26-40页
   ·papC、iucD、irp2、tsh、iss单基因PCR扩增结果第26-29页
     ·papC基因的PCR扩增第26页
     ·iucD基因的PCR扩增第26-27页
     ·irp2基因的PCR扩增第27页
     ·tsh基因的PCR扩增第27-28页
     ·iss基因的PCR扩增第28页
     ·5种基因的单基因PCR扩增结果第28-29页
   ·papC、iucD、irp2、tsh、iss基因测序与同源性比较第29-33页
     ·papC基因的PCR产物序列与同源性比较第29页
     ·iucD基因的PCR产物序列与同源性比较第29-30页
     ·irp2基因的PCR产物序列与同源性比较第30-31页
     ·tsh基因的PCR产物序列与同源性比较第31-32页
     ·iss基因的PCR产物序列与同源性比较第32-33页
   ·多重PCR反应条件的优化结果第33-37页
     ·引物浓度的优化结果第33页
     ·镁离子浓度的优化结果第33-34页
     ·Taq酶量的优化结果第34-35页
     ·退火温度的优化结果第35页
     ·延伸时间的优化结果第35-36页
     ·循环次数的优化结果第36页
     ·DNA提取方法的比较结果第36-37页
     ·优化后的多重PCR条件第37页
   ·多重PCR敏感性实验结果第37-38页
   ·多重PCR特异性实验结果第38-39页
   ·APEC安徽分离株毒力基因的多重PCR检测结果第39-40页
4 讨论第40-44页
   ·禽致病性大肠杆菌毒力基因与致病性的关系第40页
   ·多重PCR条件优化第40-42页
   ·禽致病性大肠杆菌毒力基因的测序第42页
   ·禽致病性大肠杆菌安徽分离株的毒力基因分布第42-44页
5 结论第44-45页
参考文献第45-53页
致谢第53-54页
作者简介第54页

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