| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 1 绪论 | 第8-23页 |
| ·青霉素酰化酶概述 | 第8-14页 |
| ·青霉素酰化酶的基因结构和表达调控 | 第9-10页 |
| ·青霉素酰化酶的结构 | 第10-11页 |
| ·青霉素酰化酶的作用原理及水解催化机制 | 第11页 |
| ·青霉素酸化酶的应用 | 第11-13页 |
| ·青霉素酰化酶产生菌菌种的改良 | 第13-14页 |
| ·酿酒酵母表达系统 | 第14-16页 |
| ·酿酒酵母的发展及遗传特性 | 第14-15页 |
| ·酿酒酵母表达系统的应用及前景 | 第15页 |
| ·pYES2载体 | 第15-16页 |
| ·固定化酶研究概述 | 第16-21页 |
| ·磁性材料的研究现状 | 第16-17页 |
| ·制备磁性高分子聚合物 | 第17-18页 |
| ·固定化酶技术的研究现状 | 第18-19页 |
| ·青霉素酰化酶固定化技术研究现状 | 第19-20页 |
| ·青霉素酰化酶的固定化方法 | 第20-21页 |
| ·固定化酶的材料 | 第21页 |
| ·本研究目的和意义 | 第21-23页 |
| 2 PGA基因在酿酒酵母中的表达 | 第23-39页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·抗生素 | 第23页 |
| ·主要用酶 | 第23页 |
| ·Marker | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·主要药品及试剂 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-34页 |
| ·巨大芽孢杆菌生长浓度的测定 | 第25-26页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第26页 |
| ·核酸浓度及核酸纯度测定 | 第26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第26-27页 |
| ·PCR扩增PGA目的片断 | 第27-28页 |
| ·目的片段回收(DNA琼脂糖凝胶回收试剂盒) | 第28-29页 |
| ·质粒的提取 | 第29页 |
| ·质粒载体和目的片断的制备 | 第29-30页 |
| ·PGA基因与载体pYES2的连接 | 第30-31页 |
| ·E.coli DH5a感受态细胞的制备及连接产物的转化 | 第31页 |
| ·重组质粒的提取及酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·酵母感受态细胞的制备及重组质粒的转化 | 第32页 |
| ·酵母转化子的鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组质粒在酿酒酵母H158中的诱导表达 | 第33页 |
| ·青霉素酰化酶活性测定方法 | 第33-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-39页 |
| ·巨大芽孢杆菌1.1741生长浓度的生物量 | 第34-35页 |
| ·基因组DNA提取 | 第35页 |
| ·核酸浓度和纯度测定 | 第35-36页 |
| ·PCR产物及胶回收后PGA目的片断检测 | 第36-37页 |
| ·重组质粒pYES2-PGA的酶切及PCR鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组子诱导表达 | 第38-39页 |
| 3 PGA的固定化研究 | 第39-47页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-41页 |
| ·磁性微胶囊的制备 | 第39页 |
| ·磁性微胶囊官能团活化 | 第39页 |
| ·青霉素酰化酶固定化 | 第39页 |
| ·固定化条件筛选 | 第39-40页 |
| ·游离与固定化青霉素酰化酶的酶学性质 | 第40页 |
| ·米氏常数 | 第40页 |
| ·SEM照片 | 第40-41页 |
| ·活力回收和相对活力计算公式 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-47页 |
| ·Fe_3O_4纳米粒子的光学图片与磁性微胶囊晶体冻干后的SEM照片以及结构模型 | 第41-42页 |
| ·固定化条件筛选结果 | 第42页 |
| ·游离与固定化青霉素酰化酶的酶学性质 | 第42-45页 |
| ·游离与固定青霉素酰化酶动力学分析 | 第45-46页 |
| ·活力回收和相对活力 | 第46-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 附录 | 第54-60页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |