| 提要 | 第1-5页 |
| 英文缩写表 | 第5-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-38页 |
| 一、蛋白质组学的方法和技术 | 第12-22页 |
| 1. 植物组织样品的制备 | 第13-17页 |
| ·常规技术 | 第13-15页 |
| ·蛋白质样品分级制备技术 | 第15-17页 |
| 2. 蛋白质样品分离和检测 | 第17-18页 |
| 3. 质谱鉴定技术的应用 | 第18-19页 |
| 4. 蛋白质组研究中的生物信息学 | 第19-22页 |
| ·图像分析 | 第19-21页 |
| ·拟南芥的相关信息资源 | 第21-22页 |
| 二、植物抗寒性研究进展 | 第22-36页 |
| 1. 植物在低温胁迫下的生理反应机制 | 第23-25页 |
| ·低温胁迫对植物细胞膜系统的影响 | 第23页 |
| ·低温胁迫对植物光合作用的影响 | 第23-24页 |
| ·低温胁迫对酶活性的影响 | 第24-25页 |
| ·低温胁迫对植物细胞中渗透调节物质的影响 | 第25页 |
| 2. 植物在低温胁迫下的分子反应机制 | 第25-32页 |
| ·编码功能蛋白的基因 | 第25-28页 |
| ·抗渗透胁迫相关基因 | 第26页 |
| ·抗氧化酶基因 | 第26页 |
| ·抗冻蛋白基因 | 第26-27页 |
| ·抗膜脂相的改变的基因 | 第27-28页 |
| ·低温反应基因 | 第28页 |
| ·植物脱水素 | 第28-29页 |
| ·调控基因 | 第29-32页 |
| ·蛋白激酶 | 第29-30页 |
| ·转录因子 | 第30-32页 |
| ·CBF/DREB 转录因子 | 第30-31页 |
| ·bZIP 蛋白 | 第31-32页 |
| ·WRKY 类转录因子 | 第32页 |
| ·MYB 类转录因子 | 第32页 |
| 3. 低温胁迫下植物的分子信号传导 | 第32-34页 |
| ·ABA 与植物低温信号传导 | 第32-33页 |
| ·Ca~(2+)与低温胁迫信号传导 | 第33-34页 |
| ·转录因子在低温胁迫下的表达调控 | 第34页 |
| 4. 拟南芥非生物因子胁迫蛋白质组学研究 | 第34-36页 |
| 三、本研究的立题依据及展望 | 第36-38页 |
| 第二章 拟南芥蛋白质样品的PEG 分级制备 | 第38-65页 |
| 一、实验材料 | 第38-42页 |
| 1. 植物材料 | 第38页 |
| 2. 主要仪器 | 第38页 |
| 3. 凝胶分析软件 | 第38-39页 |
| 4. 等电聚焦材料 | 第39页 |
| 5. 试剂 | 第39页 |
| 6. 常用溶液配制 | 第39-42页 |
| 二、实验方法 | 第42-52页 |
| 1. 全细胞蛋白质样品制备 | 第42-44页 |
| 2. 蛋白质样品的PEG 分级沉淀制备 | 第44-46页 |
| 3. 各组分蛋白质样品的SDS-PAGE 分析 | 第46-47页 |
| 4. 全蛋白及各组分蛋白质样品的双向电泳（2-DE） | 第47-49页 |
| ·水化 | 第47页 |
| ·第一向等电聚焦（IEF） | 第47-48页 |
| ·IPG 胶条的平衡 | 第48页 |
| ·第二向SDS-PAGE | 第48-49页 |
| ·银染显色 | 第49页 |
| 5. 2-DE 凝胶图像分析 | 第49-52页 |
| ·蛋白点检测（spot detection） | 第50页 |
| ·标准化凝胶（normalizing gels） | 第50-51页 |
| ·蛋白点匹配（spot matching） | 第51-52页 |
| 三、实验结果 | 第52-59页 |
| 1. 全细胞蛋白在PEG 分级各个组分中的分布 | 第52-55页 |
| 2. PEG 分级组分与全细胞蛋白（NF）均一性分析 | 第55-56页 |
| 3. 全细胞蛋白质提取产率和重复性 | 第56-57页 |
| 4. PEG 分级沉淀有利于低丰度蛋白的检测 | 第57-59页 |
| 四、讨论 | 第59-65页 |
| 1. PEG 分级沉淀方法的有效性 | 第59-60页 |
| 2. IPG 胶条种类的选择 | 第60-61页 |
| 3. 银染染色方法的应用 | 第61-62页 |
| 4. 双向电泳技术需要解决的问题 | 第62-65页 |
| ·低丰度蛋白的检测 | 第62-63页 |
| ·膜蛋白的提取和有效分离 | 第63-64页 |
| ·新研究方法的出现 | 第64-65页 |
| 第三章 低温胁迫下拟南芥差异蛋白质组学分析 | 第65-106页 |
| 一、实验材料 | 第65-68页 |
| 1. 植物材料 | 第65页 |
| 2. 主要仪器 | 第65页 |
| 3. 凝胶分析软件 | 第65页 |
| 4. 等电聚焦材料 | 第65-66页 |
| 5. 试剂 | 第66-67页 |
| 6. 常用溶液配制 | 第67-68页 |
| 二、实验方法 | 第68-81页 |
| 1. mRNA 差异显示（m RNA Differential Display, DD） | 第68-74页 |
| ·植物低温胁迫处理 | 第68页 |
| ·植物总RNA 的提取 | 第68-69页 |
| ·RT-PCR | 第69-72页 |
| ·引物设计及反转录 | 第69-71页 |
| ·PCR 扩增 | 第71-72页 |
| ·尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Urea-PAGE） | 第72页 |
| ·差异显示凝胶图像分析 | 第72-74页 |
| 2. 蛋白质的双向电泳及图像分析 | 第74-78页 |
| ·拟南芥蛋白质的提取 | 第74-75页 |
| ·双向电泳及染色 | 第75-76页 |
| ·双向电泳凝胶图像分析 | 第76-78页 |
| 3. 差异表达蛋白点质谱鉴定 | 第78-80页 |
| ·质谱样品制备 | 第78-79页 |
| ·胰酶解肽段混合物的MALDI-TOF-MS 检测 | 第79页 |
| ·数据库查询 | 第79-80页 |
| 4. 生物信息学分析 | 第80-81页 |
| ·蛋白质功能分类与亚细胞定位 | 第80-81页 |
| ·代谢通路分析 | 第81页 |
| 三、实验结果 | 第81-99页 |
| 1. 植物总RNA 样品的纯度和完整性 | 第81-82页 |
| 2. mRNA 差异显示及植物采集时间段的确定 | 第82-84页 |
| ·引物设计及PCR 条件优化 | 第82页 |
| ·Urea-PAGE 分析 | 第82-84页 |
| 3. 低温胁迫下拟南芥蛋白质的双向电泳分析 | 第84-89页 |
| ·低温胁迫条件下拟南芥蛋白质双向电泳 | 第84-86页 |
| ·低温胁迫条件下差异蛋白质丰度变化 | 第86-89页 |
| 4. 差异表达的蛋白质质谱鉴定结果 | 第89-96页 |
| 5. 低温胁迫条件下差异表达的蛋白质的功能分类 | 第96-98页 |
| 6. 蛋白质的细胞内定位 | 第98-99页 |
| 四、讨论 | 第99-106页 |
| 1. 植物总RNA 提取与操作注意事项 | 第99-100页 |
| 2. mRNA 差异显示技术的应用 | 第100-101页 |
| 3. 低温胁迫下拟南芥蛋白质组的动态变化 | 第101-102页 |
| 4. 低温胁迫条件下差异表达蛋白与植物抗逆性的关系 | 第102-106页 |
| ·常见低温胁迫相关蛋白 | 第102-103页 |
| ·物质代谢相关蛋白 | 第103-104页 |
| ·能量代谢相关的蛋白 | 第104-105页 |
| ·其它蛋白质的表达变化 | 第105-106页 |
| 第四章 结论 | 第106-107页 |
| 1. 植物蛋白质样品的PEG 分级制备方法 | 第106页 |
| 2. 拟南芥低温胁迫差异蛋白质组学 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-117页 |
| 附录 | 第117-130页 |
| 硕士期间发表论文 | 第130-131页 |
| 附:发表文章 | 第131-132页 |
| 详细摘要 | 第132-136页 |
| 致 谢 | 第136页 |
