| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 大鼠附睾特异性基因 Lcn6 的表达特性及功能研究 | 第8-66页 |
| 一 引言 | 第8-21页 |
| 1 附睾的结构 | 第8-9页 |
| 2 附睾的基本生理功能 | 第9-11页 |
| 3 附睾对精子成熟的影响 | 第11-13页 |
| 4 附睾中基因表达的特征 | 第13-14页 |
| 5 Lipocalin 蛋白质家族 | 第14-21页 |
| 二 材料和方法 | 第21-31页 |
| 1 实验中所用的细胞及动物 | 第21页 |
| 2 大鼠 Lcn6 基因及蛋白质序列分析 | 第21页 |
| 3 组织及细胞总RNA 的制备 | 第21页 |
| 4 RT-PCR 及realtime PCR | 第21-23页 |
| 5 大鼠 Lcn6 基因真核及原核表达载体的构建 | 第23-24页 |
| 6 大鼠 Lcn6 蛋白质的原核表达、纯化和复性 | 第24页 |
| 7 大鼠 Lcn6 多克隆抗体的制备 | 第24-25页 |
| 8 Western Blot | 第25-26页 |
| 9 免疫组化分析 | 第26-27页 |
| 10 间接免疫荧光分析 | 第27页 |
| 11 PNGase-F糖苷酶消化 | 第27页 |
| 12 RNAi靶点的选择及载体的构建 | 第27-29页 |
| 13 Lentivirus的制备 | 第29-30页 |
| 14 细胞的培养、转染及稳转细胞株的建立 | 第30页 |
| 15 大鼠附睾内的RNAi | 第30-31页 |
| 16 精子结合检测 | 第31页 |
| 17 精子运动能力检测 | 第31页 |
| 三 结果 | 第31-55页 |
| 1 大鼠 Lcn6 基因在染色体上的分布及其基因结构的分析 | 第31-34页 |
| 2 大鼠Lcn6的蛋白质序列和三维结构的预测分析 | 第34-35页 |
| 3 大鼠Lcn6蛋白质的表达纯化及抗体的制备 | 第35-37页 |
| 4 大鼠Lcn6蛋白质表达的组织特异性及区域特异性 | 第37-42页 |
| 5 大鼠Lcn6基因在发育过程中的表达特性 | 第42页 |
| 6 大鼠Lcn6蛋白质能与精子结合 | 第42-44页 |
| 7 用RNAi方法下调大鼠Lcn6的表达 | 第44-48页 |
| 8 大鼠Lcn6蛋白质与精子运动能力的关系 | 第48-51页 |
| 9 大鼠Lcn6可能通过与细胞骨架蛋白相互作用而影响精子运动及细胞连接 | 第51-55页 |
| 四 讨论 | 第55-57页 |
| 五 小结 | 第57-60页 |
| 六 参考文献 | 第60-66页 |
| 第二章 RNA 干扰在疾病治疗方面的应用 | 第66-92页 |
| 第一节 RNA 干扰与反义核酸在治疗 SARS 病毒方面的应用及比较 | 第66-90页 |
| 一 引言 | 第66-67页 |
| 二 材料和方法 | 第67-73页 |
| 1 细胞培养 | 第67-68页 |
| 2 反义脱氧寡核苷酸的设计与合成 | 第68-69页 |
| 3 siRNA 的设计、合成及退火 | 第69-70页 |
| 4 载体的构建 | 第70-71页 |
| 5 细胞转染 | 第71页 |
| 6 细胞总RNA 的抽提及RT-PCR 分析 | 第71-72页 |
| 7 荧光显微镜拍照分析 | 第72页 |
| 8 细胞活性分析 | 第72-73页 |
| 三 结果 | 第73-83页 |
| 1 转染效率的测定 | 第73页 |
| 2 核酸药物的筛选 | 第73-76页 |
| 3 核酸药物的量效关系及时效关系的测定 | 第76-78页 |
| 4 核酸药物对靶基因蛋白质产物的抑制效果的验证 | 第78-81页 |
| 5 药物毒性的检测 | 第81-83页 |
| 四 讨论 | 第83-87页 |
| 五 参考文献 | 第87-90页 |
| 第二节 RNA 干扰技术在治疗其它疾病方面的研究 | 第90-92页 |
| 在学期间发表的文章 | 第92-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
