| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 1 绪论 | 第10-26页 |
| ·甜菜碱在植物中的分布 | 第10页 |
| ·胁迫条件下甜菜碱的生理功能 | 第10-12页 |
| ·参与细胞渗透调节作用 | 第11页 |
| ·参与稳定生物大分子的功能 | 第11-12页 |
| ·影响离子在细胞内的分布 | 第12页 |
| ·植物体内甜菜碱的生物合成 | 第12-13页 |
| ·甜菜碱的理化性质 | 第13页 |
| ·植物组织中甜菜碱的提取、分离与测定方法 | 第13页 |
| ·甜菜碱的提取分离方法 | 第13页 |
| ·甜菜碱含量的测定方法 | 第13页 |
| ·甜菜碱合成相关酶的分子生物学及其基因工程 | 第13-21页 |
| ·甜菜碱醛脱氢酶(BADH) | 第14-17页 |
| ·甜菜碱醛脱氢酶(BADH)的理化特性及其在细胞中的定位 | 第14-15页 |
| ·甜菜碱醛脱氢酶BADH基因的克隆与表达研究 | 第15-17页 |
| ·甜菜碱醛脱氢酶的转基因研究 | 第17页 |
| ·胆碱单加氧酶(CMO) | 第17-21页 |
| ·胆碱单加氧酶(CMO)的分离纯化和特性研究 | 第17-18页 |
| ·植物中CMO基因的分离与表达特性研究 | 第18-20页 |
| ·胆碱单加氧酶(CMO)的基因工程 | 第20-21页 |
| ·问题与展望 | 第21-23页 |
| ·本研究的设计思想 | 第23-25页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| ·本研究的设计思想及内容 | 第24-25页 |
| ·主要的技术路线 | 第25-26页 |
| 2 NaCl胁迫对四种菊科植物叶片中甜菜碱含量的影响 | 第26-34页 |
| ·雷氏盐-紫外可见分光光度法测定甜菜碱含量的原理 | 第26-27页 |
| ·材料与方法 | 第27-29页 |
| ·仪器与试剂 | 第27页 |
| ·仪器设备 | 第27页 |
| ·试剂及其配制 | 第27页 |
| ·试验方法 | 第27-29页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第27页 |
| ·植物材料的培养与NaCl胁迫处理 | 第27-28页 |
| ·植物叶片中甜菜碱的提取与测定 | 第28页 |
| ·样品中甜菜碱的鉴定 | 第28页 |
| ·样品中甜菜碱含量的测定及结果计算 | 第28-29页 |
| ·方法的回收试验 | 第29页 |
| ·实验结果 | 第29-32页 |
| ·吸收光谱的扫描与最大波长的选择 | 第29页 |
| ·标准曲线 | 第29页 |
| ·样品中甜菜碱的定性分析 | 第29-30页 |
| ·不同NaCl胁迫处理下四种菊科植物叶片中甜菜碱含量的变化 | 第30-32页 |
| ·不同浓度NaCl处理对四种菊科植物生长的影响 | 第30页 |
| ·不同浓度NaCl处理下四种菊科植物叶片中甜菜碱的含量 | 第30页 |
| ·不同浓度NaCl处理下不同植物叶片中甜菜碱含量的多重比较 | 第30-32页 |
| ·回收率的计算 | 第32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| 3 盐胁迫甘菊CMO同源基因片段的克隆与序列分析 | 第34-49页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·植物材料 | 第35页 |
| ·菌株和质粒 | 第35页 |
| ·酶和试剂 | 第35页 |
| ·引物合成与序列测定 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-40页 |
| ·RNA提取 | 第35-36页 |
| ·RNA完整性和纯度检测 | 第36页 |
| ·RNA的完整性检查 | 第36页 |
| ·RNA OD值测定 | 第36页 |
| ·半嵌套PCR扩增甘菊中CMO同源基因cDNA片段 | 第36-38页 |
| ·简并引物的设计 | 第36-37页 |
| ·逆转录合成cDNA第一链 | 第37页 |
| ·PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·PCR扩增产物的克隆和鉴定 | 第38-40页 |
| ·低熔点胶回收目的片段 | 第38-39页 |
| ·DNA片段与载体的连接 | 第39页 |
| ·转化 | 第39页 |
| ·重组质粒的筛选、克隆与鉴定 | 第39-40页 |
| ·测序 | 第40页 |
| ·序列分析与比较 | 第40页 |
| ·实验结果 | 第40-46页 |
| ·总RNA的完整性与纯度 | 第40-41页 |
| ·甘菊CMO基因cDNA片段的克隆 | 第41-42页 |
| ·低熔点胶回收PCR扩增产物的检测 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第43页 |
| ·测序结果与分析 | 第43-46页 |
| ·甘菊CMO基因片段的测序结果与序列拼接 | 第43-46页 |
| ·甘菊CMO基因与不同植物的进化关系 | 第46页 |
| ·讨论 | 第46-49页 |
| ·RNA的提取 | 第46-47页 |
| ·简并引物的设计 | 第47-48页 |
| ·克隆策略 | 第48页 |
| ·甘菊CMO基因cDNA片段 | 第48-49页 |
| 4 NaCl胁迫下甘菊甜菜碱醛脱氢酶BADH基因的表达特性 | 第49-60页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·植物材料 | 第49页 |
| ·甘菊幼苗的NaCl胁迫处理 | 第49页 |
| ·甘菊成株的NaCl胁迫处理 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-55页 |
| ·RNA提取 | 第49页 |
| ·BADH基因片段的克隆 | 第49-50页 |
| ·引物设计 | 第49-50页 |
| ·逆转录合成cDNA第一链 | 第50页 |
| ·PCR反应 | 第50页 |
| ·PCR扩增产物的克隆、鉴定与测序 | 第50页 |
| ·Northern杂交探针制备 | 第50-52页 |
| ·试剂配制 | 第50-51页 |
| ·BADH基因杂交探针的制备 | 第51页 |
| ·探针标记效率的检测——标记探针的半定量 | 第51-52页 |
| ·Northern杂交 | 第52-55页 |
| ·RNA的提取与浓缩 | 第52-53页 |
| ·RNA电泳槽的清洗 | 第53页 |
| ·RNA的甲醛变性胶电泳 | 第53页 |
| ·转膜 | 第53-54页 |
| ·固定 | 第54页 |
| ·预杂交 | 第54页 |
| ·杂交 | 第54页 |
| ·洗膜 | 第54页 |
| ·免疫检测 | 第54-55页 |
| ·实验结果 | 第55-58页 |
| ·RNA的提取 | 第55页 |
| ·甘菊BADH基因cDNA片段的克隆 | 第55-57页 |
| ·RT-PCR | 第55-56页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第56页 |
| ·甘菊BADH基因cDNA片段的获得 | 第56-57页 |
| ·探针标记效率的检测 | 第57-58页 |
| ·甜菜碱醛脱氢酶BADH基因的表达特性 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 缩略词表 | 第68-70页 |
| 个人简介 | 第70-72页 |
| 导师简介 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 附录 | 第76-82页 |
| 图版 | 第82页 |
