| 摘要 | 第1-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-22页 |
| ·植物自交不亲和性 | 第11-16页 |
| ·植物自交不亲和性的分类和遗传特征 | 第11-12页 |
| ·禾本科自交不亲和性 | 第12-16页 |
| ·禾本科自交不亲和性的发现及其遗传方式 | 第12-13页 |
| ·禾本科自交不亲和基因的克隆与定位 | 第13-15页 |
| ·禾本科自交不亲和性的分子机制 | 第15-16页 |
| ·差异表达基因的克隆方法 | 第16-22页 |
| ·克隆差异表达基因的常用方法 | 第16-18页 |
| ·cDNA文库差示筛选法 | 第16页 |
| ·差异显示反转录PCR技术(DDRT-PCR) | 第16-17页 |
| ·代表性差示分析法(RDA) | 第17页 |
| ·基因表达系列分析法(SAGE) | 第17-18页 |
| ·抑制差减杂交 | 第18页 |
| ·DNA芯片和cDNA微列阵技术 | 第18页 |
| ·本研究采用的抑制差减杂交SSH技术简介 | 第18-22页 |
| ·抑制性消减杂交技术原理和试验流程 | 第18-19页 |
| ·SSH技术的优缺点评析 | 第19-20页 |
| ·抑制性消减杂交的应用与发展 | 第20-22页 |
| 2 引言 | 第22-23页 |
| 3.材料和方法 | 第23-37页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-37页 |
| ·试验材料的种植、取样和鉴定 | 第23页 |
| ·总RNA的抽提 | 第23-25页 |
| ·实验前的准备 | 第23页 |
| ·所需试验试剂 | 第23-24页 |
| ·抽提RNA | 第24页 |
| ·RNA含量和质量的检测 | 第24-25页 |
| ·mRNA的分离纯化 | 第25-26页 |
| ·逆转录和正反向抑制差减杂交 | 第26-31页 |
| ·mRNA反转录成cDNA | 第26-27页 |
| ·用RsaⅠ酶消化cDNA | 第27-28页 |
| ·检测RsaⅠ的消化效率 | 第28页 |
| ·将tester cDNA接头连接 | 第28-29页 |
| ·第一次杂交 | 第29页 |
| ·第二次杂交 | 第29-30页 |
| ·两轮PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·SSH第二次PCR产物的抽提 | 第31-32页 |
| ·T/A克隆、电转化和差减文库扩增 | 第32-33页 |
| ·检测PCR产物浓度 | 第32页 |
| ·PCR产物与PGEM-T easy(Promega)载体连接 | 第32页 |
| ·电转化(以下操作均在无菌环境下进行) | 第32-33页 |
| ·文库质量检测 | 第33页 |
| ·正向和反向差减cDNA文库的反向Northern差异筛选 | 第33-35页 |
| ·杂交点阵膜的制备 | 第33页 |
| ·放射性探针标记 | 第33-34页 |
| ·预杂交和杂交 | 第34页 |
| ·洗X光片 | 第34-35页 |
| ·差异表达克隆选取和阳性克隆测序 | 第35页 |
| ·阳性克隆的生物信息学分析 | 第35-37页 |
| ·差异克隆的序列同源性检索 | 第35页 |
| ·差异基因的功能聚类 | 第35-36页 |
| ·1A7的生物信息学分析 | 第36-37页 |
| 4.结果与分析 | 第37-54页 |
| ·试验株自交穗的考种和亲和性的判定 | 第37-38页 |
| ·RNA的含量和质量测定结果 | 第38-39页 |
| ·mRNA反转录成cDNA的电泳检测结果 | 第39页 |
| ·第二次扣除杂交之后的PCR产物检测 | 第39-40页 |
| ·对转化产物的PCR检测结果 | 第40-41页 |
| ·差异筛选的Dot Blotting和阳性克隆测序 | 第41-42页 |
| ·阳性克隆的生物信息学分析 | 第42-54页 |
| ·测序克隆的序列同源性分析 | 第43-45页 |
| ·差异基因的功能聚类 | 第45-46页 |
| ·1A7的生物信息学分析 | 第46-54页 |
| ·1A7的EST序列电子延伸 | 第46-47页 |
| ·Contig1A7中ORF的查找 | 第47-49页 |
| ·Contig1A7编码蛋白的分子量和等电点分析 | 第49页 |
| ·Contig1A7编码蛋白二级结构预测 | 第49页 |
| ·Contig1A7编码蛋白疏水性分析 | 第49-50页 |
| ·Contig1A7编码蛋白跨膜域的预测 | 第50-51页 |
| ·Contig1A7编码蛋白质功能域的确定 | 第51-52页 |
| ·Contig1A7与几种植物同源序列氨基酸的比较分析 | 第52-53页 |
| ·基于Contig1A7的系统发生树 | 第53-54页 |
| 5.结论与讨论 | 第54-57页 |
| ·结论 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-57页 |
| ·实验问题评价及改进方法 | 第54-55页 |
| ·Contig1A7的研究意义 | 第55页 |
| ·文库中的重点研究对象 | 第55-56页 |
| ·后续研究中的技术策略 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| Abstract: | 第66-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
| 附录1:抑制差减杂交原理流程图 | 第68页 |
| 附录2:pGEM-T Easy载体的结构和克隆位点及侧翼序列 | 第68-69页 |
| 附录3:SSH中所用的部分接头和引物序列 | 第69页 |
| 附录4:预杂交液/杂交液的配制 | 第69-70页 |
| 附录5:生物信息学分析中所用到的软件及网络连接 | 第70页 |
