| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 文献综述 | 第13-27页 |
| 一 猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展 | 第13-20页 |
| 1 PRRSV的分类地位及一般特性 | 第14页 |
| 2. 病毒的基因组结构 | 第14-15页 |
| 3. 病毒基因组的转录及表达 | 第15-16页 |
| 4. 病毒基因组所编码的蛋白 | 第16-18页 |
| 5. 病毒结构蛋白的抗原性 | 第18-19页 |
| 6. PRRSV 分离株的序列差异及遗传学变异性 | 第19页 |
| 7. 结语 | 第19-20页 |
| 二 猪繁殖与呼吸综合征诊断方法研究进展 | 第20-27页 |
| 1. 临床诊断 | 第20页 |
| 2. 病毒学检查 | 第20-26页 |
| ·病毒分离 | 第20-21页 |
| ·抗原检测 | 第21-22页 |
| ·免疫过氧化物酶(IP)技术 | 第21页 |
| ·免疫胶体金技术 | 第21-22页 |
| ·免疫荧光抗体染色技术 | 第22页 |
| ·血凝(HA)和血凝抑制((HI)试验 | 第22页 |
| ·血清学诊断技术 | 第22-24页 |
| ·免疫过氧化物醉单层试验(IPMA) | 第22-23页 |
| ·间接荧光抗体试验(IFA) | 第23页 |
| ·血清中和试验(SN) | 第23页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第23-24页 |
| ·分子生物学诊断技术 | 第24-26页 |
| ·核酸探针技术 | 第24-25页 |
| ·RT-PCR 技术 | 第25-26页 |
| 3 结语 | 第26-27页 |
| 研究内容 | 第27-60页 |
| 实验一猪繁殖与呼吸综合征病毒山东株分离株ORF7 基因的克隆和鉴定 | 第27-38页 |
| 1 材料与方法 | 第27-32页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·细胞、病毒 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·病料 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-32页 |
| ·病毒的分离 | 第27页 |
| ·细胞接种 | 第27-28页 |
| ·毒价滴定（TCID50）试验 | 第28页 |
| ·病毒的增殖 | 第28页 |
| ·病毒总 RNA 的提取 | 第28页 |
| ·CaCl_2 法制备受体菌 DH5α感受态 | 第28-29页 |
| ·扩增目的片段所用引物 | 第29页 |
| ·RT-PCR 反应 | 第29页 |
| ·PCR 产物回收纯化 | 第29-30页 |
| ·目的片段的克隆 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第31页 |
| ·重组质粒 PCR 鉴定 | 第31-32页 |
| ·目的基因序列分析 | 第32页 |
| 2 结果 | 第32-35页 |
| ·病毒分离 | 第32页 |
| ·细胞病变观察 | 第32页 |
| ·分离毒的毒价滴定试验结果 | 第32-33页 |
| ·目的基因片段的的扩增 | 第33页 |
| ·含 PCR 产物的重组质粒的双酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·含重组质粒的 PCR 鉴定 | 第34页 |
| ·阳性菌测序结果 | 第34-35页 |
| 3 讨论 | 第35-38页 |
| 实验二 PRRSV SD-1 株 ORF7 基因的原核表达载体的构建及重组蛋白的纯化 | 第38-52页 |
| 1 材料与方法 | 第38-45页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·质粒和菌株 | 第38页 |
| ·主要试剂及工具酶 | 第38页 |
| ·培养基及有关溶液的配制 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-45页 |
| ·PRRSV SD-1 株 ORF7 基因片段的扩增 | 第38-40页 |
| ·pGEX-6P-1 质粒的提取 | 第40页 |
| ·重组质粒pGEX-6P-1-N 的构建 | 第40-42页 |
| ·基因工程重组菌的诱导表达和 SDS-PAGE 分析 | 第42-43页 |
| ·目的蛋白的特异性鉴定（Western-Blot 免疫印迹） | 第43-44页 |
| ·重组菌表达条件的优化 | 第44页 |
| ·融合表达产物的纯化 | 第44-45页 |
| ·纯化目的蛋白 | 第45页 |
| 2 结果 | 第45-50页 |
| ·目的基因片段的扩增 | 第45-46页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第46页 |
| ·重组质粒的 PCR 鉴定 | 第46-47页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析结果 | 第47页 |
| ·重组蛋白的 Western-Blot 分析 | 第47-48页 |
| ·IPTG 诱导表达最佳浓度的确定 | 第48-49页 |
| ·IPTG 诱导表达最佳作用时间的确定 | 第49页 |
| ·目的蛋白的纯化结果 | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50-51页 |
| 4 小结 | 第51-52页 |
| 实验三 用一步法RT-PCR 技术快速检测 PRRSV 方法的研究 | 第52-60页 |
| 1 材料与方法 | 第52-53页 |
| ·材料 | 第52页 |
| ·送检病料 | 第52页 |
| ·病毒株 PRRSV SD-1 株 | 第52页 |
| ·试剂 | 第52页 |
| ·限制性内切酶 | 第52页 |
| ·引物 | 第52页 |
| ·方法 | 第52-53页 |
| ·病毒的增殖 | 第52页 |
| ·RT-PCR 检测自然病料中的 PRRSV | 第52页 |
| ·病毒 SD-1 株及组织中总 RNA 的提取 | 第52-53页 |
| ·反转录酶-聚合酶链反应（RT-PCR） | 第53页 |
| ·RT-PCR 特异性 | 第53页 |
| ·RT-PCR 灵敏性 | 第53页 |
| ·重复性测定 | 第53页 |
| ·RT-PCR 产物的鉴定 | 第53页 |
| 2 结果 | 第53-56页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第53-54页 |
| ·RT-PCR 的特异性 | 第54页 |
| ·RT-PCR 灵敏性测定 | 第54-55页 |
| ·病料的检测 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 附录 | 第69-71页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第71页 |
