| 目录 | 第1-10页 |
| 英文缩略词表 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-18页 |
| 第Ⅰ部分 Caplp高表达对白念珠菌耐药性的影响 | 第18-46页 |
| 实验材料与方法 | 第18-32页 |
| 1 白念珠菌菌株和质粒 | 第18-20页 |
| 2 实验试剂及配制 | 第20-23页 |
| 3 主要仪器设备 | 第23页 |
| 4 实验方法 | 第23-32页 |
| ·Caplp高表达白念珠菌的构建流程 | 第23-25页 |
| ·白念珠菌基因组DNA的抽提 | 第25页 |
| ·PCR反应 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备和转化 | 第26页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第26页 |
| ·酶切反应 | 第26-27页 |
| ·凝胶中DNA片段的回收 | 第27页 |
| ·连接反应 | 第27页 |
| ·白念珠菌的转化 | 第27-28页 |
| ·CAP1高表达菌和对照用CAP1基因缺失菌的构建 | 第28-29页 |
| ·总RNA样品制备 | 第29页 |
| ·RT-PCR实验 | 第29-31页 |
| ·Western blot | 第31-32页 |
| ·80％抑菌浓度MIC_(80)的检测 | 第32页 |
| 结果 | 第32-44页 |
| 1 CAP1基因高表达质粒的构建 | 第32-39页 |
| 2 各实验用菌株中CAP1基因的转录水平 | 第39-40页 |
| 3 各实验用菌株中CAP1基因的表达水平 | 第40-42页 |
| 4 通过检测MIC_(80)考察各实验用菌株对药物的耐受性 | 第42页 |
| 5 通过RT-PCR考察耐药相关基因的表达水平 | 第42-44页 |
| 讨论 | 第44-46页 |
| 第Ⅱ部分 Caplp参与白念珠菌氧化应激的分子机制 | 第46-93页 |
| 实验材料与方法 | 第46-61页 |
| 1 白念珠菌菌株 | 第46-47页 |
| 2 实验试剂及配制 | 第47页 |
| 3 主要仪器设备 | 第47-48页 |
| 4 实验方法 | 第48-61页 |
| ·菌株对H_2O_2的耐受力实验 | 第48页 |
| ·总RNA样品制备 | 第48页 |
| ·芯片制备 | 第48-49页 |
| ·标记探针 | 第49页 |
| ·杂交 | 第49-50页 |
| ·检测和分析 | 第50页 |
| ·Real-time RT-PCR | 第50-59页 |
| ·RT-PCR实验 | 第59页 |
| ·细胞内活性氧的检测 | 第59-60页 |
| ·细胞膜药物外排泵功能分析 | 第60-61页 |
| 结果 | 第61-85页 |
| 1 CAP1基因缺失对菌株耐受H_2O_2能力的影响 | 第61页 |
| 2 H_2O_2处理前后白念珠菌CAI4和CJD21基因表达谱的变化 | 第61-64页 |
| 3 用实时定量RT-PCR验证基因芯片结果 | 第64-70页 |
| 4 启动子区域有Caplp识别元件的氧化应激及Caplp相关基因 | 第70-72页 |
| 5 正常培养条件下CAP1缺失导致的基因表达谱的变化 | 第72-75页 |
| 6 对芯片实验结果的RT-PCR验证 | 第75-76页 |
| 7 在缺失菌中重新引入CAP1基因对表达谱的影响 | 第76-77页 |
| 8 分析启动子区域的Caplp识别元件 | 第77-79页 |
| 9 氧化刺激对有Caplp识别元件的氧化应激相关基因的影响 | 第79页 |
| 10 CAP1基因缺失对细胞内活性氧水平的影响 | 第79-80页 |
| 11 Caplp在能量依赖的物质外排中发挥作用 | 第80-82页 |
| 12 在氧化应激和正常培养条件下共同的Caplp相关基因 | 第82-85页 |
| 讨论 | 第85-93页 |
| 第Ⅲ部分 活性氧以Caplp依赖的方式激活多药耐药基因CaMDR1转录 | 第93-103页 |
| 实验材料与方法 | 第93-98页 |
| 1 白念珠菌菌株 | 第93页 |
| 2 实验试剂及配制 | 第93-95页 |
| 3 主要仪器设备 | 第95页 |
| 4 实验方法 | 第95-98页 |
| ·总RNA样品制备 | 第95页 |
| ·Northern blot | 第95-98页 |
| ·80％抑菌浓度MIC_(80)的检测 | 第98页 |
| 结果 | 第98-100页 |
| 1 H_2O_2对CaMDR1转录水平的影响 | 第98-99页 |
| 2 Caplp在H_2O_2激活CaMDR1转录过程中的作用 | 第99-100页 |
| 3 H_2O_2刺激对耐药表型的影响 | 第100页 |
| 讨论 | 第100-103页 |
| 第Ⅳ部分 耐药性研究的工具药苯菌灵的作用机制与细胞内活性氧密切相关 | 第103-113页 |
| 实验材料与方法 | 第104-107页 |
| 1 白念珠菌菌株 | 第104页 |
| 2 实验试剂及配制 | 第104-105页 |
| 3 主要仪器设备 | 第105页 |
| 4 实验方法 | 第105-107页 |
| ·80％抑菌浓度MIC_(80)的检测 | 第105页 |
| ·OD_(600)检测细胞密度的实验 | 第105页 |
| ·细胞内活性氧的检测 | 第105-106页 |
| ·RNA样品的制备 | 第106页 |
| ·Real-time RT-PCR | 第106-107页 |
| 结果 | 第107-111页 |
| 1 MIC_(80)实验考察苯菌灵与氧化损伤机制的相关性 | 第107页 |
| 2 OD_(600)检测细胞密度的实验考察苯菌灵与氧化损伤机制的相关性 | 第107-108页 |
| 3 苯菌灵对白念珠菌细胞内活性氧水平的影响 | 第108-110页 |
| 4 抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸对苯菌灵诱导CaMDR1转录的影响 | 第110-111页 |
| 讨论 | 第111-113页 |
| 第Ⅴ部分 临床常用抗真菌药物的药物作用与活性氧及氧化损伤机制有关 | 第113-136页 |
| 实验材料与方法 | 第113-115页 |
| 1 白念珠菌菌株 | 第113页 |
| 2 实验试剂及配制 | 第113-114页 |
| 3 主要仪器设备 | 第114页 |
| 4 实验方法 | 第114-115页 |
| ·细胞内活性氧的检测 | 第114-115页 |
| ·80％抑菌浓度MIC_(80)的检测 | 第115页 |
| ·生长曲线实验 | 第115页 |
| 结果 | 第115-133页 |
| 1 两性霉素B药物作用与活性氧及氧化损伤机制的相关性 | 第115-118页 |
| ·两性霉素B对白念珠菌细胞内活性氧水平的影响 | 第115-117页 |
| ·通过检测MIC_(80)考察抗氧化剂对两性霉素B抗菌作用的影响 | 第117-118页 |
| 2 伊曲康唑药物作用与活性氧及氧化损伤机制的相关性 | 第118-120页 |
| ·伊曲康唑对白念珠菌细胞内活性氧水平的影响 | 第118-120页 |
| ·通过检测MIC_(80)考察抗氧化剂对伊曲康唑抗菌作用的影响 | 第120页 |
| 3 酮康唑药物作用与活性氧及氧化损伤机制的相关性 | 第120-122页 |
| ·酮康唑对白念珠菌细胞内活性氧水平的影响 | 第120-121页 |
| ·通过检测MIC_(80)考察抗氧化剂对酮康唑抗菌作用的影响 | 第121-122页 |
| 4 咪康唑药物作用与活性氧及氧化损伤机制的相关性 | 第122-124页 |
| ·咪康唑对白念珠菌细胞内活性氧水平的影响 | 第122-124页 |
| ·通过检测MIC_(80)考察抗氧化剂对咪康唑抗菌作用的影响 | 第124页 |
| 5 氟康唑药物作用与活性氧及氧化损伤机制的相关性 | 第124-128页 |
| ·氟康唑对白念珠菌细胞内活性氧水平的影响 | 第124-125页 |
| ·通过检测MIC_(80)考察抗氧化剂对氟康唑抗菌作用的影响 | 第125-126页 |
| ·通过生长曲线实验考察抗氧化剂对氟康唑抗菌作用的影响 | 第126-128页 |
| 6 特比萘芬药物作用与活性氧及氧化损伤机制的相关性 | 第128-133页 |
| ·特比萘芬对白念珠菌细胞内活性氧水平的影响 | 第128-129页 |
| ·通过检测MIC_(80)考察抗氧化剂对特比萘芬抗菌作用的影响 | 第129-130页 |
| ·通过生长曲线实验考察抗氧化剂对特比萘芬抗菌作用的影响 | 第130-133页 |
| 讨论 | 第133-136页 |
| 总结 | 第136-138页 |
| 参考文献 | 第138-146页 |
| 附：综述一 | 第146-153页 |
| 附：综述二 | 第153-160页 |
| 发表论文、研究成果及获奖情况 | 第160-162页 |
| 致谢 | 第162页 |
