| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-20页 |
| ·海水养殖及其病害控制 | 第14-17页 |
| ·水产养殖动物细菌性病原体鳗弧菌 | 第14-15页 |
| ·水产养殖动物细菌性病原菌迟缓爱德华氏菌 | 第15-16页 |
| ·水产养殖动物细菌性病原菌气单胞菌 | 第16-17页 |
| ·渔用疫苗研究近况 | 第17-20页 |
| ·灭活疫苗 | 第17页 |
| ·减毒活疫苗 | 第17-18页 |
| ·亚单位疫苗 | 第18页 |
| ·生物技术疫苗-活细菌载体疫苗 | 第18-20页 |
| 第二章 一种改造重组表达载体提高目的蛋白表达量方法的初步研究 | 第20-33页 |
| ·引言 | 第20页 |
| ·材料与方法 | 第20-27页 |
| ·细菌与质粒 | 第20-21页 |
| ·实验用仪器 | 第21页 |
| ·高效表达序列的选择 | 第21页 |
| ·引物设计与合成 | 第21页 |
| ·pGFPuv 质粒的扩大培养及提取 | 第21-22页 |
| ·质粒DNA 片段与高效表达序列的扩增及纯化 | 第22-23页 |
| ·高效表达载体phGFPuv 的构建 | 第23-25页 |
| ·重组质粒的提取 | 第25-26页 |
| ·绿色荧光蛋白表达的显微荧光观察及荧光检测 | 第26-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-31页 |
| ·重组质粒phGFPuv 的构建 | 第27-29页 |
| ·绿色荧光蛋白表达的显微荧光观察 | 第29页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE 及荧光检测 | 第29-30页 |
| ·重组蛋白的表达量分析 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 4 条高效表达序列的效果验证 | 第33-37页 |
| ·引言 | 第33页 |
| ·材料与方法 | 第33-34页 |
| ·细菌与质粒 | 第33页 |
| ·实验用仪器 | 第33页 |
| ·验证序列的信息 | 第33-34页 |
| ·引物设计与合成 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34页 |
| ·结果与分析 | 第34-36页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE 及荧光检测 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白的表达量分析 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| 第四章 3 株水产动物病原菌主要分泌性蛋白的鉴定及其分泌性序列的分析 | 第37-55页 |
| ·引言 | 第37-38页 |
| ·材料和方法 | 第38-41页 |
| ·菌株 | 第38页 |
| ·主要仪器和化学试剂 | 第38页 |
| ·细菌培养及分泌性蛋白的制备 | 第38页 |
| ·15%的SDS-PAGE 电泳鉴定 | 第38-40页 |
| ·表达量的检测 | 第40页 |
| ·主要分泌性蛋白区带的质谱分析 | 第40页 |
| ·基因克隆及序列测定 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-53页 |
| ·获取的3 种海水细菌胞外蛋白的SDS-PAGE | 第41-43页 |
| ·主要分泌性蛋白的质谱分析 | 第43-50页 |
| ·PCR 扩增的结果 | 第50-51页 |
| ·重组载体的筛选与测序 | 第51-52页 |
| ·鉴定的蛋白序列的分泌序列分析筛选 | 第52页 |
| ·分泌序列在细胞中的定位分析 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 第五章 坚强芽孢杆菌的性质研究及GFP 标记 | 第55-64页 |
| ·引言 | 第55页 |
| ·材料和方法 | 第55-58页 |
| ·材料 | 第55页 |
| ·坚强芽孢杆菌的生长曲线测量 | 第55页 |
| ·坚强芽孢杆菌的革兰氏染色 | 第55-56页 |
| ·坚强芽孢杆菌的药物敏感实验 | 第56页 |
| ·坚强芽孢杆菌的pGFPuv 质粒标记 | 第56-57页 |
| ·含有GFP 的穿梭载体pBE2 的构建及坚强芽孢杆菌的标记 | 第57-58页 |
| ·结果与分析 | 第58-62页 |
| ·坚强芽孢杆菌的生长曲线 | 第58-59页 |
| ·坚强芽孢杆菌的革兰氏染色 | 第59-60页 |
| ·坚强芽孢杆菌的药物敏感试验结果 | 第60-61页 |
| ·坚强芽孢杆菌pGFPuv 质粒标记荧光观察 | 第61页 |
| ·重组穿梭载体pBE2-GFP 的构建 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第六章 坚强芽孢杆菌主要分泌蛋白的鉴定及其分泌性序列的分析 | 第64-75页 |
| ·引言 | 第64页 |
| ·材料和方法 | 第64-66页 |
| ·细菌培养及分泌性蛋白的制备 | 第64-65页 |
| ·分泌性蛋白SDS-PAGE | 第65页 |
| ·主要分泌性蛋白区带的质谱分析 | 第65页 |
| ·基因克隆及序列测定 | 第65-66页 |
| ·分泌性信号肽序列的生物信息学分析 | 第66页 |
| ·结果与分析 | 第66-73页 |
| ·坚强芽孢杆菌胞外蛋白的SDS-PAGE | 第66-67页 |
| ·主要分泌性蛋白的质谱分析 | 第67-71页 |
| ·PCR 扩增的结果 | 第71-72页 |
| ·重组载体的筛选与测序 | 第72页 |
| ·测序的蛋白序列的分泌序列分析筛选 | 第72-73页 |
| ·分泌序列在细胞中的定位分析 | 第73页 |
| ·讨论 | 第73-75页 |
| 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 附录 | 第84-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 攻读学位期间的科研成果 | 第88页 |
