| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 荧光共振能量转移(FRET)技术及其应用简介 | 第10-17页 |
| 1 FRET基本原理 | 第10-11页 |
| 2 FRET应用 | 第11-15页 |
| ·检测酶活性变化 | 第12-13页 |
| ·关于膜蛋白的研究 | 第13-15页 |
| ·细胞内分子之间相互作用 | 第15页 |
| 3 展望 | 第15-17页 |
| 第二章 激光共焦扫描显微镜系统及其应用简介 | 第17-23页 |
| 1 共焦扫描显微镜的发展简史 | 第17-18页 |
| 2 激光共焦扫描显微镜的原理及特性 | 第18-20页 |
| ·激光共焦扫描显微镜的原理 | 第18-19页 |
| ·LCSM的光学特性 | 第19-20页 |
| 3 激光共焦扫描显微镜系统在生物、医学中的应用 | 第20-23页 |
| ·胞内Ca~(2+)的研究 | 第20-21页 |
| ·细胞骨架的研究 | 第21-22页 |
| ·病变细胞的研究 | 第22页 |
| ·药物效用的研究 | 第22-23页 |
| 第三章 利用FRET技术对活细胞生理条件PKA酶活性的研究 | 第23-30页 |
| 1 材料与方法 | 第24-25页 |
| ·质粒及其构建 | 第24页 |
| ·瞬时转染 | 第24-25页 |
| ·稳定表达报告蛋白(AKAR)的人肺癌细胞系的筛选 | 第25页 |
| ·荧光成像 | 第25页 |
| 2 结果 | 第25-28页 |
| ·Forskolin引起PKA酶活性变化的无损伤实时记录 | 第25-26页 |
| ·EGF引起PKA酶活性变化的无损伤实时记录 | 第26-27页 |
| ·EGF引起PKA酶活性变化的空间分布差异 | 第27-28页 |
| 3 讨论 | 第28-30页 |
| 第四章 利用FRET技术对活细胞生理条件下凋亡蛋白的研究 | 第30-40页 |
| 1 材料与方法 | 第31-32页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·质粒构建 | 第31页 |
| ·细胞培养与转染 | 第31-32页 |
| ·凋亡诱导 | 第32页 |
| ·激光共聚焦扫描显微镜(LSM) | 第32页 |
| ·微型CO_2培养箱 | 第32页 |
| 2 结果 | 第32-37页 |
| ·YFP-14-3-3在人类肺癌细胞以及293细胞中的表达 | 第32-33页 |
| ·发展FRET系统检测活细胞生理条件下tBid与14-3-3蛋白间相互作用 | 第33-34页 |
| ·单个人类肺癌细胞的Bid-CFP与YFP-14-3-3蛋白相互作用的时空成像 | 第34-35页 |
| ·tBid与14-3-3蛋白各自在细胞内的动态分布 | 第35-36页 |
| ·tBid与14-3-3蛋白相互作用的的动态过程 | 第36-37页 |
| 3 讨论 | 第37-40页 |
| 第五章 构建融合蛋白YFP-14-3-3 | 第40-49页 |
| 第六章 pH值升高诱导细胞凋亡的实时研究 | 第49-59页 |
| 1 材料与方法 | 第50-52页 |
| ·材料 | 第50页 |
| ·细胞培养与转染 | 第50-51页 |
| ·稳定表达SCAT3探针的肺癌细胞系筛选 | 第51页 |
| ·激光共聚焦扫描显微镜(LSM) | 第51页 |
| ·微型CO_2培养箱 | 第51-52页 |
| 2 结果 | 第52-57页 |
| ·没有任何刺激因子加入的情况下Bid-CFP定位线粒体 | 第52页 |
| ·使用微型二氧化碳培养箱96小时内Bid-CFP不出现定位线粒体的现象 | 第52-53页 |
| ·当细胞暴露在空气中Bid-CFP定位线粒体过程的时空成像 | 第53-54页 |
| ·温度改变不会引起Bid蛋白定位线粒体 | 第54-55页 |
| ·碱性条件有调Bid-CFP蛋白定位线粒体 | 第55页 |
| ·碱性条件诱导的Caspase-3激活 | 第55-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 第七章 展望 | 第59-61页 |
| 1 激光共聚焦扫描显微镜在生物及医学领域中的应用前景展望 | 第59页 |
| 2 荧光成像在分子生物学研究研究中的应用前景展望 | 第59页 |
| 3 FRET技术在细胞生物学领域中的应用前景展望 | 第59-61页 |
| 结束语 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 发表论文 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
