| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-29页 |
| ·α-半乳糖苷酶研究概况 | 第14-17页 |
| ·α-半乳糖苷酶的结构特点 | 第14页 |
| ·α-半乳糖苷酶的专一性 | 第14-15页 |
| ·α-半乳糖苷酶的活性研究 | 第15页 |
| ·α-半乳糖苷键的分布 | 第15页 |
| ·α-半乳糖苷类键的应用 | 第15-17页 |
| ·α-半乳糖苷酶与豆粕饲料 | 第15-16页 |
| ·α-半乳糖苷酶与制糖工业 | 第16页 |
| ·α-半乳糖苷酶与化学工业 | 第16-17页 |
| ·α-半乳糖苷酶与血型改造 | 第17页 |
| ·α-半乳糖苷酶与食品工业 | 第17页 |
| ·MEL1基因的研究进展 | 第17-20页 |
| ·MEL1基因的特点 | 第17-18页 |
| ·蛋白序列结构特点 | 第18-19页 |
| ·MEL基因家族 | 第19页 |
| ·MEL1基因在酵母双杂交系统中的应用 | 第19-20页 |
| ·酿酒酵母表达系统 | 第20-22页 |
| ·用于基因表达的宿主菌-酿酒酵母 | 第20页 |
| ·用于酵母基因表达的两类载体 | 第20-21页 |
| ·YIp(yeast integration plasmid)型载体 | 第20-21页 |
| ·YEp(yeast episomal plasmid)型载体 | 第21页 |
| ·酿酒酵母基因表达系统研究现状及其优缺点 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第22-24页 |
| ·表达载体 | 第22-23页 |
| ·研究进展 | 第23-24页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第24-27页 |
| ·毕赤酵母表达宿主菌 | 第24页 |
| ·常用载体及其特点 | 第24-25页 |
| ·载体的整合 | 第25-26页 |
| ·外源蛋白翻译后修饰 | 第26页 |
| ·展望 | 第26-27页 |
| ·问题的提出 | 第27-28页 |
| ·课题研究的来源、意义与目标 | 第28-29页 |
| 第二章 a-半乳糖苷酶组成型表达基因在酿酒酵母中的表达 | 第29-40页 |
| ·材料和方法 | 第29-35页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·质粒与菌株 | 第29-30页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·PCR引物设计 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-35页 |
| ·酵母基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| ·MEL1基因的扩增及T-A克隆 | 第31-32页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第32页 |
| ·连接反应 | 第32页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第32-33页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第33页 |
| ·酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组质粒pGAD-GAL的构建及筛选 | 第34页 |
| ·重组质粒pGAD-GAL转化宿主酵母 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-38页 |
| ·载体构建 | 第35-36页 |
| ·酵母基因组DNA的提取 | 第36-37页 |
| ·MEL1基因的克隆与测序 | 第37页 |
| ·重组质粒pGAD-GAL的构建及筛选 | 第37-38页 |
| ·pGAD-Gal重组载体连接部分 | 第38页 |
| ·重组质粒pGAD-GAL转化酵母 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 α-半乳糖苷酶基因MEL1在大肠杆菌中的表达 | 第40-49页 |
| ·材料和方法 | 第40-43页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-43页 |
| ·酵母基因组DNA的提取 | 第41页 |
| ·MEL1基因的扩增 | 第41页 |
| ·目的基因的酶切 | 第41页 |
| ·表达载体pRSET的酶切 | 第41-42页 |
| ·目的片段与载体的连接与转化 | 第42页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第42页 |
| ·重组质粒的转化 | 第42页 |
| ·诱导表达 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-47页 |
| ·载体构建 | 第43-44页 |
| ·酵母基因组DNA的提取结果 | 第44-45页 |
| ·MEL1基因的扩增 | 第45页 |
| ·表达载体pRSET的酶切 | 第45页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第45-46页 |
| ·pRSET-Gal重组载体连接部分 | 第46页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第46-47页 |
| ·表达产物的活性检测 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 α-半乳糖苷酶基因MEL1在毕赤酵母中的组成型表达 | 第49-61页 |
| ·材料和方法 | 第49-52页 |
| ·材料与试剂 | 第49-50页 |
| ·菌株及质粒 | 第49-50页 |
| ·培养基 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-52页 |
| ·酵母基因组DNA的提取 | 第50页 |
| ·质粒pGAPZ α A的制备 | 第50页 |
| ·PCR引物设计 | 第50页 |
| ·MEL1基因的扩增及T-A克隆 | 第50-51页 |
| ·重组质粒pGAPZ α-GAL的构建及筛选 | 第51页 |
| ·重组质粒pGAD-GAL转化宿主酵母KM71及鉴定 | 第51-52页 |
| ·α-半乳糖苷酶的表达分析 | 第52页 |
| ·α-半乳糖苷酶的酶活测定 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-59页 |
| ·载体构建 | 第52-53页 |
| ·酵母基因组DNA的提取 | 第53-54页 |
| ·质粒pGAPZ α A的制备 | 第54页 |
| ·MEL1基因的克隆 | 第54-55页 |
| ·重组质粒pGAPZ α-GAL的构建及筛选 | 第55-56页 |
| ·pGAPZ α-Gal重组载体连接部分 | 第56页 |
| ·重组质粒pGAD-GAL转化酵母 | 第56-57页 |
| ·制作标准曲线 | 第57-58页 |
| ·α-半乳糖苷酶的表达分析 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 总结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-71页 |
| 附录A.缩略词表 | 第71-72页 |
| 附录B.主要试剂配制 | 第72-76页 |
| 附录C.MEL1基因序列 | 第76-79页 |
| 附录D.MEL1测序报告 | 第79-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 作者简介 | 第83页 |
