| 中文摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 本文所用缩略词 | 第15-17页 |
| 第一部分 文献综述 | 第17-39页 |
| 第一章 植物雄性不育的研究 | 第17-24页 |
| 1 植物雄性不育的类型 | 第17-18页 |
| 2 植物胞质雄性不育(CMS)分子机理的研究 | 第18-20页 |
| ·叶绿体DNA(cpDNA)及其产物与CMS | 第18-19页 |
| ·线粒体DNA(mtDNA)及其产物与CMS | 第19-20页 |
| ·核质互作与CMS | 第20页 |
| 3 基因工程创造雄性不育 | 第20-21页 |
| 4 棉花细胞质雄性不育(CMS)的研究 | 第21-22页 |
| 5 恢复基因的克隆 | 第22-24页 |
| 第二章 图位克隆(Map-based Cloning) | 第24-31页 |
| 1 图位克隆的技术步骤 | 第24-28页 |
| ·筛选与目标基因连锁的分子标记 | 第24-27页 |
| ·随机扩增多态性DNA | 第24-25页 |
| ·微卫星DNA | 第25-26页 |
| ·STS(Sequence Tagged Sites) | 第26-27页 |
| ·目的基因区域的精细作图(Fine Map) | 第27页 |
| ·构建物理图谱(Physical Map) | 第27-28页 |
| ·克隆基因(Gene Cloning) | 第28页 |
| 2 物理图谱(Physical Map)的构建 | 第28-31页 |
| ·物理图谱的构建策略 | 第29页 |
| ·菌落杂交 | 第29页 |
| ·PCR技术 | 第29页 |
| ·构建物理图谱的关键要素 | 第29-30页 |
| ·克隆载体 | 第29页 |
| ·克隆末端分离技术 | 第29-30页 |
| ·染色体行走技术 | 第30页 |
| ·物理图谱研究进展 | 第30-31页 |
| 第三章 基因组文库的构建 | 第31-39页 |
| 1 基因组文库 | 第31页 |
| ·基因组文库的概念 | 第31页 |
| ·基因组文库的类型 | 第31页 |
| 2 细菌人工染色体(BAC)文库 | 第31-38页 |
| ·BAC文库的优点 | 第31-32页 |
| ·BAC文库的载体 | 第32-34页 |
| ·pBeloBACll载体 | 第32页 |
| ·pIndigoBAC-5载体 | 第32-33页 |
| ·双元T-DNA载体BIBAC(Binary BAC library) | 第33-34页 |
| ·BAC克隆策略 | 第34-35页 |
| ·BAC的应用 | 第35-36页 |
| ·棉花BAC文库的研究进展 | 第36-38页 |
| 3 研究目的与意义 | 第38-39页 |
| 第二部分 研究报告 | 第39-83页 |
| 第四章 棉花胞质雄性不育(CMS)恢复基因的精细作图 | 第39-49页 |
| Ⅰ 材料与方法 | 第39-43页 |
| 1 材料 | 第39-41页 |
| ·遗传作图材料 | 第39-40页 |
| ·分子标记的种类及其来源 | 第40-41页 |
| ·SSR标记 | 第40页 |
| ·RAPD标记 | 第40页 |
| ·STS标记 | 第40-41页 |
| 2 方法 | 第41-43页 |
| ·育性调查 | 第41页 |
| ·棉花基因组DNA(微量)的提取 | 第41-42页 |
| ·分子标记分析 | 第42-43页 |
| ·SSR分析 | 第42页 |
| ·RAPD分析 | 第42页 |
| ·STS分析 | 第42-43页 |
| ·遗传图谱的构建 | 第43页 |
| Ⅱ 结果与分析 | 第43-47页 |
| 1 BC_1群体遗传分析 | 第43页 |
| 2 分子标记分析 | 第43-46页 |
| ·SSR分析 | 第43-45页 |
| ·RAPD分析 | 第45页 |
| ·STS分析 | 第45-46页 |
| ·分子标记来源及特征带大小 | 第46页 |
| 3 Rf_1基因紧密连锁图谱的构建 | 第46-47页 |
| Ⅲ 讨论 | 第47-49页 |
| 1 精细作图的影响因素 | 第47-48页 |
| ·表型鉴定的准确性 | 第47-48页 |
| ·双亲之间的遗传差异 | 第48页 |
| ·作图群体大小 | 第48页 |
| 2 育性恢复基因紧密连锁标记的应用 | 第48-49页 |
| ·MAS应用 | 第48页 |
| ·图位克隆应用 | 第48-49页 |
| 第五章 棉花CMS恢复系细菌人工染色体(BAC)基因组文库的构建 | 第49-67页 |
| Ⅰ 材料与方法 | 第49-59页 |
| 1 材料 | 第49页 |
| 2 方法 | 第49-59页 |
| ·棉花高分子量核DNA的制备 | 第49-50页 |
| ·叶片的准备 | 第49页 |
| ·细胞核的分离 | 第49-50页 |
| ·胶块的制备 | 第50页 |
| ·胶块质量的检测 | 第50页 |
| ·部分酶切最佳酶用量的确定 | 第50-52页 |
| ·酶切缓冲液(1) | 第50-51页 |
| ·酶切缓冲液(2) | 第51-52页 |
| ·确定部分酶切最佳酶用量 | 第52页 |
| ·大片段DNA的大量酶切 | 第52-53页 |
| ·酶切DNA片段的大小选择 | 第53-54页 |
| ·电洗脱回收大片段DNA | 第54页 |
| ·大片段DNA与载体DNA的连接 | 第54-55页 |
| ·连接产物的转化 | 第55页 |
| ·单克隆文库及混合克隆文库的构建 | 第55-56页 |
| ·BAC文库的分析 | 第56-57页 |
| ·文库质量的分析 | 第56页 |
| ·BAC单克隆稳定性的检测 | 第56-57页 |
| ·细菌质粒DNA(微量)的提取 | 第57-58页 |
| ·单个离心管(1.5ml)提取BAC质粒DNA | 第57-58页 |
| ·96孔板提取细菌质粒DNA | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58-59页 |
| Ⅱ 结果与分析 | 第59-65页 |
| 1 棉花基因组文库的构建 | 第59-62页 |
| ·棉花高分子量核DNA的制备 | 第59页 |
| ·幼苗的避光培养 | 第59页 |
| ·防氧化处理 | 第59页 |
| ·不溶性杂质的去除 | 第59页 |
| ·酶切片段的选择 | 第59-60页 |
| ·电洗脱回收DNA | 第60-62页 |
| ·连接与转化 | 第62页 |
| ·单克隆的挑取 | 第62页 |
| 2 BAC文库的质量分析 | 第62-65页 |
| ·插入片段大小 | 第62-63页 |
| ·BAC单克隆稳定性 | 第63-65页 |
| Ⅲ 讨论 | 第65-67页 |
| 1 棉花基因组文库构建的方法 | 第65-66页 |
| ·棉花高分子量基因组DNA的制备 | 第65页 |
| ·目的片段的二次选择 | 第65页 |
| ·目的片段DNA的回收 | 第65-66页 |
| ·Not Ⅰ酶切位点 | 第66页 |
| 2 棉花BAC文库的优点与作用 | 第66-67页 |
| ·BAC的优点 | 第66页 |
| ·BAC文库的作用 | 第66-67页 |
| ·基因的图位克隆 | 第66页 |
| ·开发新的分子标记 | 第66页 |
| ·BAC-FISH(Fluorescence in situ hybridization)的应用 | 第66-67页 |
| 第六章 棉花CMS恢复基因的物理作图 | 第67-83页 |
| Ⅰ 材料与方法 | 第67-69页 |
| 1 材料 | 第67页 |
| ·BAC文库 | 第67页 |
| ·分子标记 | 第67页 |
| ·限制性内切酶 | 第67页 |
| 2 方法 | 第67-69页 |
| ·分子标记分析 | 第67页 |
| ·质粒的提取 | 第67-68页 |
| ·PCR法筛选BAC文库 | 第68页 |
| ·PCR法筛选文库策略 | 第68页 |
| ·PCR筛选BAC文库 | 第68页 |
| ·重叠群构建 | 第68页 |
| ·BAC末端测序 | 第68-69页 |
| ·BAC末端序列的引物设计 | 第69页 |
| ·新标记的增加 | 第69页 |
| Ⅱ 结果与分析 | 第69-80页 |
| 1 分子标记筛选 | 第69-74页 |
| ·SSR筛选 | 第69-72页 |
| ·RAPD筛选 | 第72-73页 |
| ·STS筛选 | 第73-74页 |
| 2 限制性酶切图谱的构建 | 第74-80页 |
| ·Not Ⅰ酶切 | 第74页 |
| ·HindⅢ酶切 | 第74-77页 |
| ·重叠群(Contig)的构建 | 第77-79页 |
| ·BAC末端测序 | 第79页 |
| ·精细图谱的构建 | 第79-80页 |
| Ⅲ 讨论 | 第80-83页 |
| 1 BC_1作图群体的效率 | 第80-81页 |
| 2 PCR法筛选BAC文库的可行性 | 第81页 |
| 3 BACs的指纹图谱 | 第81页 |
| 4 重叠群(Contig)的构建 | 第81-82页 |
| 5 BACs末端测序 | 第82页 |
| 6 增加了新的分子标记 | 第82页 |
| 7 CMS细胞质雄性不育育性恢复机理探讨 | 第82-83页 |
| 全文结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-92页 |
| 附录 | 第92-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 在读期间发表的论文 | 第112页 |
