| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-24页 |
| ·研究背景 | 第13页 |
| ·RHDV 研究现状 | 第13-20页 |
| ·RHDV 病原学 | 第13-14页 |
| ·RHDV 分子生物学 | 第14-16页 |
| ·RHD 的流行病学与组织病理学 | 第16-17页 |
| ·RHDV 的检测 | 第17-18页 |
| ·RHD 的防控 | 第18-20页 |
| ·昆虫-杆状病毒表达系统 | 第20页 |
| ·家蚕-杆状病毒表达系统 | 第20-22页 |
| ·家蚕-杆状病毒表达系统的优点 | 第20-21页 |
| ·家蚕生物反应器表达策略的优化 | 第21-22页 |
| ·家蚕-杆状病毒表达系统在疫苗生产方面的研究及应用 | 第22页 |
| ·研究目的和意义 | 第22-23页 |
| ·实验研究方案 | 第23-24页 |
| 第二章 检测抗体的制备 | 第24-39页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·仪器与试剂 | 第24页 |
| ·菌株与质粒 | 第24页 |
| ·引物 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-31页 |
| ·实验流程 | 第25页 |
| ·RHDV-vp60 基因序列优化和合成 | 第25-26页 |
| ·目的片段的扩增 | 第26页 |
| ·PCR 产物的纯化、回收 | 第26页 |
| ·PCR 产物与 pMD18-T 载体的连接 | 第26页 |
| ·E.coli 热击感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·连接产物的转化 | 第27页 |
| ·鉴定阳性克隆质粒 | 第27-28页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第28-29页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第29页 |
| ·表达产物存在形式的检测 | 第29页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第29页 |
| ·重组蛋白的质谱鉴定 | 第29页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第29-30页 |
| ·兔源多克隆抗体制备 | 第30-31页 |
| ·多克隆抗体效价检测 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-37页 |
| ·vp60 基因序列的优化 | 第31页 |
| ·目的片段的扩增 | 第31-32页 |
| ·pMD18-T-RHDV-vp60 的酶切验证 | 第32-33页 |
| ·重组质粒 pET-28a-RHDV-vp60 的验证 | 第33页 |
| ·重组蛋白表达条件 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白存在形式 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第35页 |
| ·重组蛋白的质谱分析 | 第35-36页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第36-37页 |
| ·多克隆抗体效价测定 | 第37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 兔出血症病毒衣壳蛋白基因在家蚕中的表达 | 第39-51页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·仪器与试剂 | 第39页 |
| ·菌株与质粒、病毒 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-44页 |
| ·实验流程 | 第39-40页 |
| ·重组杆状病毒转移载体的构建 | 第40-41页 |
| ·家蚕细胞的准备 | 第41页 |
| ·病毒 Bm-BacPAK6 基因组 DNA 的制备 | 第41页 |
| ·基因组 DNA 的线性化 | 第41页 |
| ·共转染 | 第41页 |
| ·重组病毒 reBm-RHDV 在蚕体中表达 | 第41-42页 |
| ·RHDV-vp60 基因表达产物的抗原性分析 | 第42页 |
| ·筛选高表达的克隆毒株 | 第42页 |
| ·RHDV-vp60 基因在家蚕中的表达 | 第42页 |
| ·RHDV 空衣壳的纯化 | 第42页 |
| ·RHDV 空衣壳电镜观察 | 第42-43页 |
| ·RHD 疫苗的制备及免疫 | 第43页 |
| ·免疫兔血清中抗体的检测 | 第43页 |
| ·免疫兔病理检测 | 第43-44页 |
| ·实验结果 | 第44-50页 |
| ·重组转移载体的鉴定 | 第44页 |
| ·蚕体中 RHDV 衣壳蛋白基因的表达 | 第44-45页 |
| ·真核表达蛋白的免疫印迹检测 | 第45-46页 |
| ·高表达毒株的筛选 | 第46页 |
| ·RHDV 电镜观察 | 第46-47页 |
| ·兔血清中抗体的检测 | 第47-48页 |
| ·免疫兔病理检测 | 第48-50页 |
| ·讨论 | 第50-51页 |
| 第四章 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 附录 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简历 | 第64页 |
