| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第一部分 材料与方法 | 第11-31页 |
| 1． 材料 | 第11-15页 |
| 1．1 植物材料 | 第11页 |
| 1．2 根癌农杆菌及质粒 | 第11页 |
| 1．3 主要试剂 | 第11-12页 |
| 1．4 培养基及溶液 | 第12-15页 |
| 2． 方法 | 第15-31页 |
| 2．1 无菌苗的获取 | 第15页 |
| 2．2 油菜植株再生系统的优化 | 第15-16页 |
| 2．2．1 最佳外植体的确定 | 第15页 |
| 2．2．2 小苗的龄期对愈伤组织诱导的影响 | 第15-16页 |
| 2．2．3 下胚轴的预培养对愈伤诱导的影响 | 第16页 |
| 2．2．4 激素对下胚轴再生芽形成的影响 | 第16页 |
| 2．2．5 AgNO_3对芽再生的影响 | 第16页 |
| 2．3 抑菌剂和各种选择压浓度的测定 | 第16-17页 |
| 2．3．1 恢复培养中外植体抑菌采用的抗生素浓度 | 第16页 |
| 2．3．2 卡那霉素(kan)选择压 | 第16-17页 |
| 2．3．3 除草剂草甘麟选择压 | 第17页 |
| 2．4 重组质粒向农杆菌中的转化 | 第17-22页 |
| 2．4．1 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第17-18页 |
| 2．4．2 从大肠杆菌中制备少量质粒的方案 | 第18-19页 |
| 2．4．3 质粒DNA限制酶切反应 | 第19页 |
| 2．4．4 从大肠杆菌中制各大量质粒的方案 | 第19-20页 |
| 2．4．5 农杆菌EHA105感受态细胞制备及其转化方案 | 第20-21页 |
| 2．4．6 从转化的农杆菌中制备少量的质粒 | 第21-22页 |
| 2．5 油菜高效农杆菌转化体系的建立 | 第22-23页 |
| 2．5．1 农杆菌介导的遗传转化 | 第22页 |
| 2．5．2 筛选培养 | 第22-23页 |
| 2．5．3 乙酰丁香酮(AS)对油菜转化的影响 | 第23页 |
| 2．6 转基因油菜外源基因整合与表达的检测 | 第23-29页 |
| 2．6．1 小量植物基因组 DNA抽提试剂盒小量抽提油菜总 DNA(用于PCR检测) | 第23-24页 |
| 2．6．2 大量抽提油菜总DNA(用于Southern杂交) | 第24页 |
| 2．6．3 转基因油菜的PCR检测 | 第24-25页 |
| 2．6．4 转化植株Southern杂交 | 第25-29页 |
| 2．7 草甘膦抗性油菜苗的移栽及草甘膦抗性的检测 | 第29-31页 |
| 2．7．1 草甘麟抗性苗的田间栽种和夏繁 | 第29页 |
| 2．7．2 T_1代油菜苗的田间栽种 | 第29-30页 |
| 2．7．3 草甘膦抗性苗的抗性检测 | 第30-31页 |
| 第二部分 结果与分析 | 第31-46页 |
| 1 最佳植株再生系统的建立 | 第31-35页 |
| 1．1 最佳外植体及其苗龄的确定 | 第31-32页 |
| 1．2 下胚轴的预培养对愈伤诱导的影响 | 第32-33页 |
| 1．3 激素对下胚轴再生芽形成的影响 | 第33-34页 |
| 1．4 AgNO_3对外植体芽分化频率的影响 | 第34-35页 |
| 2． 抑菌剂和各种选择压浓度的确定 | 第35-37页 |
| 2．1 恢复培养中采用的抑菌剂carb的浓度 | 第35-36页 |
| 2．2 卡那霉素(kan)选择压 | 第36页 |
| 2．3 除草剂草甘膦选择压 | 第36-37页 |
| 3． 质粒向农杆菌中的转化和鉴定 | 第37-38页 |
| 3．1 质粒向农杆菌中的转化 | 第37页 |
| 3．2 农杆菌转化的鉴定 | 第37-38页 |
| 4． 高效油菜农杆菌遗传转化系统 | 第38-39页 |
| 4．1 农杆菌菌液浸染时间对转化的影响 | 第38页 |
| 4．2 共培养时间对转化的影响 | 第38-39页 |
| 4．3 乙酰丁香酮(AS)对油菜转化的影响 | 第39页 |
| 5． 外源基因整合与表达的检测结果 | 第39-44页 |
| 5．1 油菜基因组 DNA的小量抽提 | 第39-40页 |
| 5．2 PCR的检测结果 | 第40-41页 |
| 5．2．1 中间引物的PCR扩增图谱 | 第40页 |
| 5．2．2 全长引物的PCR扩增图谱 | 第40-41页 |
| 5．3 Southern杂交 | 第41-44页 |
| 5．3．1 总DNA的质量 | 第41-42页 |
| 5．3．2 总DNA酶切、电泳及浓缩 | 第42-43页 |
| 5．3．3 探针标记 | 第43-44页 |
| 6． 油菜抗性苗的移栽，夏繁及草甘膦抗性的检测 | 第44-46页 |
| 6．1 油菜抗性苗的移栽及其人工春化 | 第44页 |
| 6．2 T_0代油菜抗性苗的抗性检测 | 第44-45页 |
| 6．3 T_0代油菜抗性苗的可育性 | 第45页 |
| 6．4 T_1代油菜抗性苗的抗性检测 | 第45-46页 |
| 第三部分 讨论与结论 | 第46-51页 |
| 1 讨论 | 第46-50页 |
| 1．1 高频油菜再生体系的建立 | 第46-49页 |
| 1．1．1 最佳外植体的选择 | 第46页 |
| 1．1．2 预培养对外植体转化效率的影响 | 第46-47页 |
| 1．1．3 玻璃化现象 | 第47-48页 |
| 1．1．4 抗生素对外植体转化效率的影响 | 第48页 |
| 1．1．5 筛选方法及时期的选择 | 第48-49页 |
| 1．1．6 乙酰丁香酮在试验当中的应用 | 第49页 |
| 1．2 抗草甘膦转基因油菜的分子检测和抗性检测 | 第49-50页 |
| 2． 结论 | 第50-51页 |
| 文献综述 | 第51-67页 |
| 图版 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 在读硕士期间发表论文和获奖情况 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 声明 | 第80页 |
