| 第一章 文献综述 | 第1-25页 |
| 1．1 引言 | 第8页 |
| 1．2 包涵体蛋白体外复性研究 | 第8-20页 |
| 1．2．1 基因重组蛋白质在E.coli中的表达 | 第8-10页 |
| 1．2．2 包涵体的分离、洗涤和溶解 | 第10-11页 |
| 1．2．3 蛋白质折叠复性的机理 | 第11-13页 |
| 1．2．4 蛋白质体外重折叠复性的方法 | 第13-18页 |
| 1．2．4．1 稀释和透析复性法 | 第13-14页 |
| 1．2．4．2 折叠促进剂协助复性 | 第14页 |
| 1．2．4．3 分子伴侣和折叠酶促进的复性 | 第14-16页 |
| 1．2．4．4 液相层析复性 | 第16-18页 |
| 1．2．5 复性后重组蛋白的检测方法 | 第18-20页 |
| 1．3 人γ-干扰素 | 第20-23页 |
| 1．3．1 人γ-干扰素(hIFN-γ)的氨基酸序列及三维结构 | 第21-22页 |
| 1．3．2 人γ-干扰素的理化性质 | 第22-23页 |
| 1．3．3 人γ-干扰素的生物学作用 | 第23页 |
| 1．4 本文的研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 重组人γ-干扰素包涵体的制备、洗涤、溶解及稀释复性 | 第25-38页 |
| 2．1 材料与仪器 | 第25-26页 |
| 2．1．1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2．1．2 培养基 | 第26页 |
| 2．1．3 实验仪器 | 第26页 |
| 2．2 实验方法 | 第26-28页 |
| 2．2．1 基因工程菌的活化和生长 | 第27页 |
| 2．2．2 菌体收集与破碎 | 第27页 |
| 2．2．3 包涵体的洗涤纯化 | 第27页 |
| 2．2．4 包涵体的溶解 | 第27-28页 |
| 2．2．5 重组人γ-干扰素的稀释复性 | 第28页 |
| 2．3 分析方法 | 第28-33页 |
| 2．3．1 菌体浓度测定 | 第28页 |
| 2．3．2 SDS-PAGE电泳 | 第28页 |
| 2．3．3 考马斯亮蓝法 | 第28-29页 |
| 2．3．4 生物学活性检定—细胞致病效应(CPE)抑制微量测定法。 | 第29-31页 |
| 2．3．5 ABS-ELISA法检测γ-干扰素 | 第31-33页 |
| 2．4 实验结果与讨论 | 第33-37页 |
| 2．4．1 重组人γ-干扰素的发酵 | 第33-35页 |
| 2．4．2 重组人γ-干扰素包涵体的洗涤纯化与溶解 | 第35-36页 |
| 2．4．3 重组人γ-干扰素的稀释复性 | 第36-37页 |
| 2．5 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 重组人γ-干扰素的离子交换层析复性 | 第38-49页 |
| 3．1 材料与仪器 | 第39-40页 |
| 3．1．1 实验材料 | 第39页 |
| 3．1．2 实验仪器 | 第39-40页 |
| 3．2 实验方法 | 第40-41页 |
| 3．2．1 变性蛋白样品的制备 | 第40页 |
| 3．2．2 重组人γ-干扰素的离子交换层析复性 | 第40-41页 |
| 3．3 分析方法 | 第41-42页 |
| 3．3．1 蛋白质浓度测定 | 第41-42页 |
| 3．3．2 SDS-PAGE电泳 | 第42页 |
| 3．3．3 重组人γ-干扰素活性测定 | 第42页 |
| 3．4 实验结果与讨论 | 第42-48页 |
| 3．4．1 离子交换柱的吸附条件 | 第42-43页 |
| 3．4．2 流速对IEC复性的影响 | 第43-45页 |
| 3．4．3 尿素梯度长度对IEC复性的影响 | 第45-46页 |
| 3．4．4 尿素终浓度对IEC复性的影响 | 第46-47页 |
| 3．4．5 上样量对IEC复性的影响 | 第47-48页 |
| 3．5 本章小结 | 第48-49页 |
| 第四章 重组人γ-干扰素的疏水层析复性 | 第49-59页 |
| 4．1 材料与仪器 | 第50页 |
| 4．1．1 实验材料 | 第50页 |
| 4．1．2 实验仪器 | 第50页 |
| 4．2 实验方法 | 第50-52页 |
| 4．2．1 重组人γ-干扰素包涵体溶解液的制备 | 第50-51页 |
| 4．2．2 疏水层析样品的准备 | 第51页 |
| 4．2．3 疏水层析复性重组人γ-干扰素 | 第51-52页 |
| 4．2．3．1 等尿素浓度法复性重组人γ-干扰素 | 第51页 |
| 4．2．3．2 线性尿素梯度法复性重组人γ-干扰素 | 第51-52页 |
| 4．2．4 透析 | 第52页 |
| 4．3 分析方法 | 第52-53页 |
| 4．3．1 重组人γ-干扰素蛋白浓度测定 | 第52页 |
| 4．3．2 SDS-PAGE电泳 | 第52页 |
| 4．3．3 ABS-ELISA法检测γ-干扰素 | 第52-53页 |
| 4．3．4 细胞致病效应(CPE)抑制微量测定法 | 第53页 |
| 4．4 实验结果与讨论 | 第53-58页 |
| 4．4．1 疏水层析中的硫酸铵浓度 | 第53-54页 |
| 4．4．2 等尿素梯度疏水层析复性重组人γ-干扰素 | 第54-55页 |
| 4．4．3 线性尿素梯度疏水层析复性重组人γ-干扰素 | 第55-58页 |
| 4．4．3．1 缓冲液B中尿素浓度对重组人γ-干扰素复性的影响 | 第55-56页 |
| 4．4．3．2 尿素梯度长度对重组人γ-干扰素复性的影响 | 第56-57页 |
| 4．4．3．3 流速对重组人γ-干扰素复性的影响 | 第57页 |
| 4．4．3．4 上样量对重组人γ-干扰素复性的影响 | 第57-58页 |
| 4．5 本章小结 | 第58-59页 |
| 第五章 固定化小分子伴侣复合柱协助重组人γ-干扰素复性 | 第59-70页 |
| 5．1 材料与仪器 | 第60-61页 |
| 5．1．1 实验材料 | 第60页 |
| 5．1．2 培养基 | 第60页 |
| 5．1．3 实验仪器 | 第60-61页 |
| 5．2 实验方法 | 第61-62页 |
| 5．2．1 小分子伴侣的生产 | 第61页 |
| 5．2．1．1 菌种活化 | 第61页 |
| 5．2．1．2 种子培养 | 第61页 |
| 5．2．1．3 基因工程菌的发酵 | 第61页 |
| 5．2．2 小分子伴侣的分离纯化 | 第61-62页 |
| 5．2．2．1 细胞收集和破碎 | 第61-62页 |
| 5．2．2．2 亲和层析 | 第62页 |
| 5．2．2．3 产品脱盐浓缩 | 第62页 |
| 5．2．3 重组人γ-干扰素包涵体的制备与变性溶解 | 第62页 |
| 5．2．4 固定化小分子伴侣复合柱协助rhIFN-γ复性 | 第62页 |
| 5．2．4．1 小分子伴侣的固定化 | 第62页 |
| 5．2．4．2 固定化小分子伴侣复合柱复性 | 第62页 |
| 5．3 分析方法 | 第62-63页 |
| 5．3．1 菌体浓度测定 | 第63页 |
| 5．3．2 蛋白浓度测定 | 第63页 |
| 5．3．3 SDS-PAGE电泳分析 | 第63页 |
| 5．3．4 ABS-ELISA法检测γ-干扰素 | 第63页 |
| 5．4 实验结果与讨论 | 第63-69页 |
| 5．4．1 小分子伴侣的制备与纯化 | 第63-65页 |
| 5．4．2 Ni-NTA凝胶固定化小分子伴侣 | 第65页 |
| 5．4．3 固定化小分子伴侣复合柱复性rhIFN-γ | 第65-69页 |
| 5．4．3．1 复合柱中SEC柱体积对rhIFN-γ复性的影响 | 第66-67页 |
| 5．4．3．2 流速对复合柱复性rhIFN-γ的影响 | 第67页 |
| 5．4．3．3 上样量及上样方式对复合柱复性rhIFN-γ的影响 | 第67-68页 |
| 5．4．3．4 两种固定化方式对复合柱复性rhIFN-γ的影响 | 第68-69页 |
| 5．5 本章小结 | 第69-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
