| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 目录 | 第4-7页 |
| 第一章 前言 | 第7-23页 |
| 1 病毒与宿主相互作用的分子机制 | 第7-11页 |
| ·宿主因子对病毒的作用 | 第7-8页 |
| ·病毒对宿主的作用 | 第8页 |
| ·病毒与宿主研究的模型系统 | 第8-10页 |
| ·雀麦花叶病毒(BMV)／酵母表达系统 | 第8-9页 |
| ·拟南芥系统 | 第9-10页 |
| ·需要解决的问题 | 第10-11页 |
| 2 低度病毒／板栗疫病菌系统 | 第11-21页 |
| ·低毒病毒和板栗疫病菌研究简介 | 第11-14页 |
| ·低毒病毒 | 第11-13页 |
| ·低毒病毒的种类 | 第13-14页 |
| ·板栗疫菌低毒病毒侵染性克隆的构建 | 第14页 |
| ·板栗疫病菌 | 第14-16页 |
| ·病原菌形态特征和培养性状 | 第15页 |
| ·病原菌的营养性亲和与有性亲和性系统 | 第15-16页 |
| ·低毒病毒／板栗疫病菌系统的特点和已积累的知识 | 第16-19页 |
| ·低毒病毒的基因组结构 | 第17页 |
| ·病毒对宿主基因表达的调控 | 第17-19页 |
| ·板栗疫病菌的生物防治 | 第19-21页 |
| ·病毒的脱毒研究 | 第21页 |
| 3 本论文拟解决的问题 | 第21-23页 |
| ·低毒病毒在真菌不同生长阶段或状态下的脱毒 | 第21-22页 |
| ·与病毒侵染引起的症状表达有关的宿主靶基因的发现和克隆 | 第22-23页 |
| 第二章 真菌脱毒方法的比较研究 | 第23-31页 |
| 1 材料 | 第23-25页 |
| ·板栗疫病菌菌株 | 第23页 |
| ·培养基及培养条件 | 第23-25页 |
| ·大肠杆菌培养基及培养条件 | 第23页 |
| ·板栗疫病菌培养基及培养条件 | 第23-25页 |
| 2 方法 | 第25-28页 |
| ·光诱导产孢 | 第25页 |
| ·原生质体的再生 | 第25-27页 |
| ·真菌原生质体的制备 | 第25-27页 |
| ·真菌原生质体的再生 | 第27页 |
| ·尖端分离法 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-30页 |
| ·带毒菌株与不带病毒菌株的形态特征比较 | 第28页 |
| ·光照诱导分生孢子的脱毒 | 第28-29页 |
| ·原生质体再生脱毒 | 第29-30页 |
| ·尖端切离继代培养脱毒 | 第30页 |
| 4 讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 板栗疫病菌受病毒侵染后与症状表达有关的靶标基因的克隆 | 第31-52页 |
| 1 材料 | 第31-33页 |
| ·板栗疫病菌菌株 | 第31页 |
| ·细菌菌株 | 第31页 |
| ·质粒 | 第31页 |
| ·EP155单交换随机整合质粒文库 | 第31-32页 |
| ·抗生素及其使用浓度 | 第32页 |
| ·常用溶液及缓冲液 | 第32-33页 |
| 2 方法 | 第33-41页 |
| ·质粒大量提取 | 第33-34页 |
| ·板栗疫病菌总DNA的提取 | 第34页 |
| ·目的DNA片段的分离和回收 | 第34-35页 |
| ·载体去磷酸化 | 第35页 |
| ·连接反应 | 第35页 |
| ·RbCl_2制备新鲜的大肠杆菌感受态细胞 | 第35-36页 |
| ·热击法转化 | 第36页 |
| ·LCl突变体库的构建 | 第36-37页 |
| ·突变株的纯化 | 第37页 |
| ·突变株dsRNA的检测 | 第37-38页 |
| ·DNA的酶切 | 第38页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第38页 |
| ·Southern杂交 | 第38-40页 |
| ·向下毛细管转移法进行Southern印迹 | 第38-39页 |
| ·DNA印迹的杂交分析 | 第39-40页 |
| ·预杂交 | 第39页 |
| ·探针标记 | 第39-40页 |
| ·洗膜 | 第40页 |
| ·质粒拯救 | 第40页 |
| ·亚克隆 | 第40页 |
| ·测序 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-50页 |
| ·质粒pUCHyg的构建 | 第41页 |
| ·EP155单交换随机整合文库的构建 | 第41-42页 |
| ·EP155单交换随机整合文库的质量分析 | 第42-43页 |
| ·板栗疫病菌突变体库的构建 | 第43页 |
| ·产孢突变株的筛选纯化 | 第43-44页 |
| ·突变株的分子鉴定 | 第44-45页 |
| ·质粒拯救 | 第45页 |
| ·pRB910质粒的亚克隆 | 第45-46页 |
| ·pUCB910亚克隆文库的测序结果 | 第46页 |
| ·突变基因的初步分析 | 第46-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| ·用EP155单交换随机整合文库进行插入诱变获得突变体的筛选 | 第50页 |
| ·用单交换随机整合质粒文库获取突变体的效率 | 第50页 |
| ·关于质粒拯救 | 第50-51页 |
| ·突变株和突变基因 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
