| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-20页 |
| ·未培养微生物 | 第9-15页 |
| ·未培养微生物研究技术的进展 | 第10-11页 |
| ·metagenomic library的研究现状 | 第11-15页 |
| ·环境总DNA提取纯化的研究 | 第11-13页 |
| ·目前已报道的metagenomic DNA library | 第13-15页 |
| ·从未培养微生物DNA文库克隆纤维素酶基因 | 第15-19页 |
| ·降解纤维素的细菌 | 第16-18页 |
| ·细菌的纤维素酶系统 | 第18-19页 |
| ·纤维素酶的工业应用 | 第19页 |
| ·从未培养微生物文库中克隆纤维素酶基因 | 第19页 |
| ·本研究的目的 | 第19-20页 |
| 第二章 方法 | 第20-34页 |
| ·菌株与质粒 | 第20页 |
| ·菌种保存 | 第20-21页 |
| ·培养基、培养条件和抗生素 | 第21-22页 |
| ·常规溶液、缓冲液 | 第22页 |
| ·质粒提取 | 第22-23页 |
| ·DNA的酶切、电泳及DNA片段测算 | 第23页 |
| ·总DNA的部分消化 | 第23-24页 |
| ·电透析洗脱法回收DNA片段 | 第24-25页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第25-26页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第26-27页 |
| ·堆肥堆制 | 第27页 |
| ·环境未培养微生物总DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·直接提取法 | 第27-28页 |
| ·间接提取法 | 第28页 |
| ·环境总DNA的纯化 | 第28-29页 |
| ·Cosmid文库的构建 | 第29-30页 |
| ·文库的筛选(CMCase活性) | 第30页 |
| ·质粒的转座缺失 | 第30-31页 |
| ·基因的表达与蛋白质产物纯化 | 第31页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第31-32页 |
| ·CMCase酶活测定 | 第32-34页 |
| 第三章 环境总DNA提取与纯化方法的建立 | 第34-42页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·直接提取法与间接提取法提取DNA的比较 | 第34-35页 |
| ·DNA的纯化 | 第35-38页 |
| ·对提取的土壤总DNA进行16S rDNA基因的序列分析 | 第38-41页 |
| ·结论 | 第41-42页 |
| 第四章 metagenomic Cosmid文库的构建及基因筛选 | 第42-53页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·直接提取法构建的metagenomic Cosmid文库 | 第42-44页 |
| ·文库的构建与筛选 | 第42-43页 |
| ·18S rDNA基因扩增检测真核生物DNA | 第43-44页 |
| ·间接提取法构建的metagenomic Cosmid文库 | 第44-45页 |
| ·CMCase活性法筛选文库 | 第45-46页 |
| ·CMCase基因的序列测定与分析 | 第46-52页 |
| ·umce19A基因的序列分析 | 第47-49页 |
| ·umce19B基因的序列分析 | 第49-52页 |
| ·结论 | 第52-53页 |
| 第五章 纤维素酶基因的表达 | 第53-62页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·umce19A基因与umce19B基因表达质粒的构建 | 第53-57页 |
| ·umce19A与umce19B基因的表达 | 第57-59页 |
| ·umce19A与umce19B蛋白质的酶学特性分析 | 第59-61页 |
| ·结论 | 第61-62页 |
| 第六章 总结与讨论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第69页 |
