| 原创声明 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一部分 综述 | 第8-32页 |
| 一、 我国罗非鱼的养殖现状及其研究意义 | 第8-13页 |
| 1 分类与分布 | 第8页 |
| 2 我国罗非鱼的引入与养殖状况 | 第8-10页 |
| 3 罗非鱼养殖中的存在问题及解决办法 | 第10-11页 |
| 4 本论文研究的意义与技术路线 | 第11-13页 |
| 二、 鱼类的性别与人工控制 | 第13-29页 |
| 1 鱼类性别决定的遗传学基础 | 第13-22页 |
| ·鱼类性别决定的细胞遗传学基础研究现状 | 第13-19页 |
| ·鱼类性别决定分子遗传学研究概况 | 第19-22页 |
| 2 环境因子与性别决定 | 第22-24页 |
| ·温度的影响 | 第22-23页 |
| ·外源激素的影响 | 第23-24页 |
| ·其它因素的影响 | 第24页 |
| 3 鱼类性别控制 | 第24-29页 |
| ·鱼类性别控制的意义 | 第25页 |
| ·鱼类性别人工控制的方法 | 第25-29页 |
| 三、 DMRT基因的研究进展 | 第29-32页 |
| 第二部分 研究论文 | 第32-55页 |
| 一、 实验材料与方法 | 第32-42页 |
| 1 实验材料 | 第32-33页 |
| ·实验用鱼 | 第32页 |
| ·实验药品与仪器 | 第32页 |
| ·引物设计与合成 | 第32-33页 |
| 2 实验方法 | 第33-42页 |
| ·奥利亚罗非鱼卵巢总RNA的提取 | 第33页 |
| ·罗非鱼血液DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第34页 |
| ·从琼脂糖凝胶或PCR液中回收DNA | 第34-35页 |
| ·从奥利亚罗非鱼总RNA的反转录 | 第35-36页 |
| ·巢式PCR扩增DM-domain区域 | 第36页 |
| ·RACE(rapid amplification of cDNA ends)法扩增DMO基因 | 第36-39页 |
| ·PCR产物的连接反应 | 第39页 |
| ·氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第39页 |
| ·连接产物的转化 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第40页 |
| ·保菌 | 第40页 |
| ·碱裂解法提取质粒DNA | 第40-41页 |
| ·质粒DNA限制酶切鉴定 | 第41页 |
| ·从奥利亚和尼罗罗非鱼DNA中扩增DMO基因 | 第41-42页 |
| 二、 实验结果 | 第42-52页 |
| ·奥利亚罗非鱼总RNA的提取 | 第42页 |
| ·cDNA的合成 | 第42页 |
| ·DM-domain区的扩增 | 第42-43页 |
| ·158bp碱基片段的BLASTP比较 | 第43-44页 |
| ·3'RACE的扩增 | 第44页 |
| ·5'RACE的扩增 | 第44-45页 |
| ·奥利亚罗非鱼DMO cDNA的序列拼接 | 第45-46页 |
| ·奥列亚罗非鱼DMO氨基酸的同源性分析 | 第46-50页 |
| ·奥列亚罗非鱼DMO氨基酸的系统树分析 | 第50页 |
| ·奥利亚罗非鱼DMO cDNA限制性酶切位点分析 | 第50页 |
| ·基因组DNA的提取、基因完整性检测及DNA浓度定量 | 第50-51页 |
| ·奥利亚和尼罗罗非鱼DNA中扩增DMO基因 | 第51-52页 |
| 三、 讨论 | 第52-54页 |
| ·DM-domain的保守性 | 第52页 |
| ·DMO基因与DMRT1基因的区别 | 第52页 |
| ·RACE法分离全长cDNA的优势和关键因素 | 第52-53页 |
| ·罗非鱼的性别决定机制 | 第53-54页 |
| 四、 结果与展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 附录 | 第63-66页 |
| 致谢 | 第66页 |