中文摘要 | 第1-6页 |
英文摘要 | 第6-7页 |
引言 | 第7-9页 |
研究内容部分 | 第9-70页 |
第一部分 猪带绦虫六钩蚴cDNA表达文库的构建 | 第9-37页 |
引言 | 第10-11页 |
1 材料与方法 | 第11-28页 |
·材料 | 第11-12页 |
·材料来源与保存 | 第11页 |
·酶、载体及试剂 | 第11页 |
·仪器和设备 | 第11-12页 |
·实验方法 | 第12-28页 |
·猪带绦虫六钩蚴的孵化与激活 | 第12页 |
·六钩蚴总RNA的提取 | 第12-14页 |
·六钩蚴mRNA的分离 | 第14-17页 |
·六钩蚴cDNA表达文库的构建 | 第17-25页 |
·六钩蚴cDNA表达文库的代表性鉴定 | 第25-28页 |
2 结果 | 第28-32页 |
·六钩蚴的孵化与激活 | 第28页 |
·RNA和mRNA的含量及纯度 | 第28-29页 |
·cDNA含量测定 | 第29-31页 |
·cDNA.文库的鉴定 | 第31-32页 |
3 讨论 | 第32-37页 |
·六钩蚴的孵化与激活 | 第33-34页 |
·总RNA和mRNA的含量和完整性 | 第34页 |
·六钩蚴cDNA的全长性 | 第34-35页 |
·cDNA的定向克隆性 | 第35页 |
·六钩蚴cDNA表达文库的质量 | 第35-37页 |
第二部分 六钩蚴cDNA表达文库的免疫原基因的筛选与克隆 | 第37-52页 |
引言 | 第38页 |
1 材料与方法 | 第38-46页 |
·材料 | 第38-39页 |
·载体、酶和试剂 | 第38页 |
·仪器和设备 | 第38-39页 |
·方法 | 第39-46页 |
·筛选菌落的准备 | 第39页 |
·NC膜的处理 | 第39-40页 |
·抗体筛选 | 第40-41页 |
·阳性菌落的分离 | 第41页 |
·免疫筛选阳性克隆的质粒提取 | 第41-42页 |
·重组质粒的鉴定 | 第42-44页 |
·目的片段与克隆载体的连接及鉴定 | 第44-45页 |
·目的片段的测序与序列分析 | 第45-46页 |
2 结果 | 第46-48页 |
·阳性克隆的筛选结果 | 第46页 |
·阳性克隆的重组质粒鉴定结果 | 第46-47页 |
·免疫原基因的克隆与鉴定结果 | 第47-48页 |
·免疫原基因序列的分析结果 | 第48页 |
3 讨论 | 第48-52页 |
·目的基因克隆策略的选择 | 第48-51页 |
·免疫学筛选表达文库的要点 | 第51-52页 |
第三部分 免疫原基因Ts01的表达与功能分析 | 第52-68页 |
1 材料与方法 | 第53-58页 |
·材料 | 第53页 |
·载体、酶及试剂 | 第53页 |
·仪器设备 | 第53页 |
·方法 | 第53-58页 |
·重组表达载体的构建 | 第53-55页 |
·Ts01基因的诱导表达 | 第55-56页 |
·Ts01基因表达产物的SDS-PAGE电泳检测 | 第56-57页 |
·Ts01基因表达产物的Western-blot分析 | 第57页 |
·Ts01基因表达产物的稳定性检测 | 第57-58页 |
·Ts01基因及其编码蛋白的结构预测 | 第58页 |
2. 结果 | 第58-63页 |
·重组表达质粒的鉴定结果 | 第58-59页 |
·重组体的诱导表达结果 | 第59页 |
·Ts01表达产物的免疫活性分析 | 第59页 |
·Ts01融合蛋白的稳定性分析 | 第59-60页 |
·Ts01基因编码蛋白结构的预测 | 第60-63页 |
3 讨论 | 第63-68页 |
·大肠杆菌表达载体选择策略 | 第64-65页 |
·外源蛋白质表达部位选择策略 | 第65-66页 |
·外源蛋白质融合表达策略 | 第66页 |
·生物信息学技术预测蛋白结构 | 第66-67页 |
·外源蛋白融合表达特点 | 第67-68页 |
第四部分 结论 | 第68-70页 |
文献综述部分 | 第70-96页 |
参考文献 | 第96-106页 |
附录 | 第106-120页 |
致谢 | 第120-121页 |
作者简历 | 第121页 |