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vMIP-Ⅱ在大肠杆菌表达、纯化的条件优化及活性鉴定

目录第1-7页
中文摘要第7-8页
Abstract第8-10页
缩略语表第10-11页
1 前言第11-19页
2 实验材料第19-26页
3 实验方法及步骤第26-34页
   ·细菌的培养第26页
   ·vMIP-Ⅱ的表达及诱导条件的优化第26-27页
     ·生长培养基的选择第26页
     ·诱导时间的选择第26页
     ·诱导剂浓度的选择第26页
     ·诱导温度的选择第26-27页
   ·vMIP-Ⅱ蛋白的亲和纯化及条件优化第27-29页
     ·制备细胞抽提物第27-28页
     ·破碎条件的优化第28-29页
       ·不同量MgSO_4对菌体破碎率的影响第28页
       ·不同浓度MgSO_4对菌体破碎率及亲和的影响第28-29页
       ·不同蔗糖浓度对菌体破碎率及亲和的影响第29页
   ·重组蛋白的Western blot鉴定第29-30页
   ·vMIP-Ⅱ体外对趋化因子受体的封闭作用第30-34页
     ·外周血单个核细胞的分离第30页
     ·姬姆萨(Giemsa)染色观察细胞形态第30-31页
     ·体外趋化性分析第31页
     ·细胞粘附实验第31-32页
     ·淋巴细胞增殖实验第32-34页
4 结果第34-46页
   ·菌体诱导及其条件的优化第34-35页
     ·生长培养基对大肠杆菌生长速度的影响第34页
     ·诱导剂浓度对vMIP-Ⅱ基因表达的影响第34-35页
     ·诱导时间对vMIP-Ⅱ基因表达的影响第35页
     ·温度对vMIP-Ⅱ基因表达的影响第35页
   ·vMIP-Ⅱ/MBP融合蛋白亲和层析及其条件的优化第35-37页
     ·vMIP-Ⅱ/MBP融合蛋白亲和层析第35-36页
     ·vMIP-Ⅱ/MBP融合蛋白免疫印记第36-37页
   ·菌体破碎及亲和条件的优化第37-40页
     ·不同量MgSO_4对破碎的影响第37-38页
     ·不同浓度MgSO_4对破碎及亲和的影响第38-39页
     ·不同浓度P_2缓冲液对破碎及亲和的影响第39-40页
   ·vMIP-Ⅱ对趋化因子受体的封闭作用第40-44页
     ·趋化实验第40-41页
     ·粘附实验第41-44页
   ·vMIP-Ⅱ对外周血单个核细胞增殖的影响第44-46页
5 讨论第46-51页
6 实验结论第51-52页
7 参考文献第52-61页
8 附图和说明第61-62页
9 在读期间发表的论文第62-63页
10 致谢第63页

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