| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-26页 |
| ·活性氧简介 | 第11-17页 |
| ·活性氧的产生机制 | 第11页 |
| ·活性氧的伤害 | 第11-13页 |
| ·活性氧的清除 | 第13-17页 |
| ·植物细胞中抗坏血酸的合成途径 | 第17-19页 |
| ·植物细胞中抗坏血酸合成过程中相关酶的研究 | 第19-22页 |
| ·GDP-甘露糖焦磷酸化酶 | 第20页 |
| ·GDP-甘露糖-3,5-表异构酶 | 第20页 |
| ·L-半乳糖-1-磷酸酯酶 | 第20-21页 |
| ·L-半乳糖脱氢酶 | 第21页 |
| ·L-半乳糖内酯脱氢酶 | 第21页 |
| ·D-半乳糖醛酸还原酶 | 第21页 |
| ·L-古洛糖-1,4-内酯氧化酶 | 第21-22页 |
| ·肌醇加氧酶 | 第22页 |
| ·植物体内抗坏血酸含量与逆境胁迫的关系 | 第22-23页 |
| ·低温胁迫 | 第22-23页 |
| ·盐胁迫 | 第23页 |
| ·激素胁迫 | 第23页 |
| ·GME 基因国内外研究现状 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 棉花 GhGME 基因克隆及其表达分析 | 第26-47页 |
| ·前言 | 第26页 |
| ·实验材料 | 第26-29页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·酶与试剂 | 第26-27页 |
| ·溶液配方及常用抗生素与激素的配置 | 第27-28页 |
| ·模板与引物 | 第28-29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·仪器与设备 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-40页 |
| ·GhGME 基因的克隆 | 第29-38页 |
| ·棉花 GhGME 基因组织特异性表达和胁迫表达分析 | 第38-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-45页 |
| ·总 RNA 的提取和棉花 GhGME 基因 EST 目的片段的扩增 | 第40-41页 |
| ·棉花 GhGME 基因克隆 | 第41-42页 |
| ·棉花 GhGME 基因进化分析 | 第42-44页 |
| ·棉花 GhGME 基因在根、茎、叶中的表达分析 | 第44页 |
| ·棉花 GhGME 基因在低温、盐胁迫和 GA3处理下的表达分析 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第三章 原核表达载体构建及蛋白质表达 | 第47-58页 |
| ·前言 | 第47页 |
| ·实验材料 | 第47-49页 |
| ·菌株与载体 | 第47页 |
| ·酶与试剂 | 第47页 |
| ·溶液配方及常用抗生素与激素的配置 | 第47-49页 |
| ·模板与引物 | 第49页 |
| ·培养基 | 第49页 |
| ·仪器与设备 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-54页 |
| ·带有酶切位点的 GhGME 基因（简称原核 GhGME）扩增 | 第49-50页 |
| ·原核 GhGME 基因克隆到 pGEM-Teasy 上及序列检测 | 第50页 |
| ·pGEM-T-原核 GhGME 质粒提取 | 第50页 |
| ·pGEM-T-原核 GhGME 双酶切及酶切产物回收 | 第50-51页 |
| ·pET-23b 载体双酶切及酶切产物回收 | 第51页 |
| ·目的基因和表达载体的连接 | 第51-52页 |
| ·转化感受态大肠杆菌 | 第52页 |
| ·原核表达载体 pET-23b- GhGME 的酶切鉴定 | 第52-53页 |
| ·工程菌的制备 | 第53页 |
| ·GhGME 酶蛋白诱导 | 第53页 |
| ·GhGME 酶蛋白分离与纯化 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-56页 |
| ·重组质粒 pGEM-T-原核 GhGME 的构建与分析 | 第54页 |
| ·原核表达载体 pET-23b- GhGME 的构建与分析 | 第54-55页 |
| ·工程菌的制备及 PCR 鉴定 | 第55页 |
| ·重组质粒 pET-23b- GhGME 在大肠杆菌 BL21 中的诱导表达 | 第55-56页 |
| ·GhGME 酶蛋白的纯化 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 真核表达载体构建及烟草遗传转化 | 第58-74页 |
| ·前言 | 第58页 |
| ·实验材料 | 第58-60页 |
| ·菌株与载体 | 第58页 |
| ·酶与试剂 | 第58页 |
| ·溶液配方及常用抗生素与激素的配置 | 第58页 |
| ·模板与引物 | 第58-59页 |
| ·培养基 | 第59-60页 |
| ·仪器与设备 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-67页 |
| ·带有酶切位点的 GhGME 基因（简称真核 GhGME）扩增 | 第60-61页 |
| ·真核 GhGME 基因克隆到 pGEM-Teasy 上及序列检测 | 第61页 |
| ·pGEM-T-真核 GhGME 质粒提取 | 第61页 |
| ·pGEM-T-真核 GhGME 双酶切及酶切产物回收 | 第61页 |
| ·pBin438 载体双酶切及酶切产物回收 | 第61页 |
| ·目的基因和表达载体的连接 | 第61-62页 |
| ·转化感受态大肠杆菌 | 第62页 |
| ·真核表达载体 pBin438- GhGME 的酶切鉴定 | 第62页 |
| ·根癌农杆菌 LBA4404 感受态细胞的制备 | 第62-63页 |
| ·农杆菌的电击转化 | 第63页 |
| ·烟草无菌苗的培养 | 第63-64页 |
| ·烟草转化 | 第64-65页 |
| ·转基因烟草植株筛选 | 第65-66页 |
| ·转基因烟草植株抗坏血酸含量测定 | 第66-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-72页 |
| ·重组质粒 pGEM-T-真核 GhGME 的构建与分析 | 第67-68页 |
| ·真核表达载体 pBin438- GhGME 的构建与分析 | 第68页 |
| ·工程菌的制备及 PCR 鉴定 | 第68-69页 |
| ·烟草转化结果 | 第69-71页 |
| ·影响转化效率相关因素 | 第71页 |
| ·转基因烟草苗的抗坏血酸测定 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-74页 |
| 第五章 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 作者简介 | 第83-84页 |
| 张宁导师简介 | 第84-85页 |
| 吴家和导师简介 | 第85-86页 |
