| 提要 | 第1-9页 |
| 第一篇 文献综述 | 第9-26页 |
| 第一章 单加氧酶研究综述 | 第9-22页 |
| ·P450 单加氧酶 | 第9-19页 |
| ·P450 单加氧酶研究简史 | 第9-11页 |
| ·P450 的命名法则 | 第11页 |
| ·P450 单加氧酶的结构 | 第11-12页 |
| ·P450 单加氧酶的天然底物 | 第12-13页 |
| ·P450 单加氧酶催化的反应 | 第13-15页 |
| ·P450 的多样性 | 第15-17页 |
| ·单型P450 的分离纯化与鉴定 | 第17-19页 |
| ·植物P450 单加氧酶 | 第19-22页 |
| ·植物中P450 单加氧酶的分布与含量 | 第19页 |
| ·P450 单加氧酶在植物中的功能 | 第19-21页 |
| ·植物P450 单加氧酶的分子生物学特征 | 第21页 |
| ·植物P450 单加氧酶的研究展望 | 第21-22页 |
| 第二章 环境逆境对作物的影响 | 第22-25页 |
| ·温度 | 第22-23页 |
| ·温度对植物的影响 | 第22页 |
| ·植物对高温的伤害及其耐热性研究的意义 | 第22-23页 |
| ·紫外线 | 第23-25页 |
| ·UV-B 辐射增强对植物的影响 | 第23-24页 |
| ·UV-B 辐射对植物基因表达的调控 | 第24-25页 |
| 第三章 本论文的研究目的和意义 | 第25-26页 |
| 第二篇 研究内容 | 第26-62页 |
| 第一章 水稻单加氧酶基因的克隆 | 第26-39页 |
| 1 材料和方法 | 第26-33页 |
| ·实验材料 | 第26-28页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·克隆载体和菌株 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·溶液 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-33页 |
| ·水稻基因组DNA 的小量提取 | 第28页 |
| ·引物的设计 | 第28页 |
| ·PCR 扩增目的片断 | 第28-29页 |
| ·DNA 琼脂糖电泳 | 第29页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第29-30页 |
| ·连接 | 第30页 |
| ·CaCl_2 法细菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·细菌转化 | 第30-31页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第31页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒DNA | 第31-32页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的测序 | 第33页 |
| 2 结果 | 第33-36页 |
| ·单加氧酶的生物信息学分析 | 第33-35页 |
| ·P450 单加氧酶基因克隆 | 第35页 |
| ·单加氧酶基因的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·测序 | 第36页 |
| 3 讨论 | 第36-39页 |
| ·试验与生物信息学分析相结合对功能未知基因进行分析 | 第36-37页 |
| ·PCR 技术在基因克隆方面的应用 | 第37-39页 |
| 第二章 单加氧酶基因的原核表达及其生化特性 | 第39-50页 |
| 1 材料和方法 | 第39-44页 |
| ·实验材料 | 第39-40页 |
| ·植物材料与病原菌 | 第39页 |
| ·表达载体与菌株 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39-40页 |
| ·培养基 | 第40页 |
| ·主要溶液 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-44页 |
| ·RNA 的提取 | 第40-41页 |
| ·RT-PCR 克隆单加氧酶基因 | 第41-42页 |
| ·原核表达 | 第42页 |
| ·12% SDS-PAGE 聚丙烯酰铵凝胶电泳 | 第42-43页 |
| ·蛋白样品的制备 | 第43页 |
| ·单加氧酶活性的测定 | 第43页 |
| ·pH 值对单加氧酶活性的影响 | 第43页 |
| ·温度对单加氧酶活性的影响 | 第43页 |
| ·单加氧酶抗50℃高温测定 | 第43-44页 |
| 2 结果 | 第44-47页 |
| ·cDNA 的克隆及原核表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·原核表达单加氧酶蛋白 | 第45页 |
| ·原核表达单加氧酶活性测定 | 第45-46页 |
| ·pH 值对单加氧酶活性的影响 | 第46页 |
| ·温度对单加氧酶活性的影响 | 第46-47页 |
| ·单加氧酶抗50℃高温测定 | 第47页 |
| 3 讨论 | 第47-50页 |
| 第三章 真核表达及其生物学功能验证 | 第50-62页 |
| 1 材料和方法 | 第50-55页 |
| ·材料 | 第50-52页 |
| ·植物材料 | 第50页 |
| ·菌株和载体 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·培养基 | 第50-51页 |
| ·主要溶液 | 第51-52页 |
| ·实验方法 | 第52-55页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第52页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第52页 |
| ·农杆菌的转化及鉴定 | 第52-53页 |
| ·拟南芥的种植 | 第53页 |
| ·真空渗透法转化拟南芥及筛选 | 第53-54页 |
| ·转基因拟南芥全蛋白质的提取 | 第54页 |
| ·转基因拟南芥50℃高温抗性研究 | 第54页 |
| ·转基因拟南芥紫外线抗性研究 | 第54-55页 |
| 2 结果 | 第55-58页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第55页 |
| ·转基因拟南芥的筛选 | 第55页 |
| ·单加氧酶在拟南芥中的表达 | 第55-56页 |
| ·单加氧酶在拟南芥中的活性 | 第56-57页 |
| ·转基因拟南芥50℃高温抗性验证 | 第57页 |
| ·转基因拟南芥紫外线照射抗性验证 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 中文摘要 | 第72-74页 |
| 英文摘要 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 导师简介 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78-79页 |