| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 英文缩略语表 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一章 文献回顾 | 第14-28页 |
| 1 人肝细胞色素P450及其在药物代谢中作用的研究进展 | 第14-21页 |
| ·CYP的命名与分布 | 第14-15页 |
| ·CYP的组成及其在药物代谢中的贡献 | 第15-16页 |
| ·CYP的遗传多态性及其在药物代谢中的影响 | 第16-18页 |
| ·药物代谢动力学的研究进展 | 第18-21页 |
| ·体内代谢研究进展 | 第18-20页 |
| ·以肝脏为基础的体外代谢研究进展 | 第20-21页 |
| 2 多态性CYP2D6研究进展 | 第21-28页 |
| ·CYP2D6的位置及基因结构 | 第22页 |
| ·CYP2D6的晶体结构 | 第22-23页 |
| ·CYP2D6的多态性研究 | 第23-25页 |
| ·CYP2D6的基因多态性与表型多态性 | 第23-24页 |
| ·CYP2D6基因多态性的分子机制 | 第24-25页 |
| ·CYP2D6与药物相互作用 | 第25-28页 |
| ·CYP2D6的代谢底物及其相互作用 | 第25-27页 |
| ·CYP2D6的抑制剂及其相互作用 | 第27-28页 |
| 第二章 人CYP2D6野生株及单核苷酸突变株cDNA的克隆以及在酿酒酵母中的表达 | 第28-41页 |
| 1 材料 | 第28-30页 |
| ·菌株和质粒 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·主要培养基及缓冲液 | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-36页 |
| ·pYES2/CT-CYP2D6重组表达载体的构建 | 第30-33页 |
| ·重组酵母菌株的构建 | 第33-34页 |
| ·目的蛋白的表达和鉴定 | 第34-35页 |
| ·酵母微粒体的制备和检测 | 第35-36页 |
| 3 实验结果 | 第36-38页 |
| ·pYES2/CT-CYP2D6重组表达载体的构建 | 第36-38页 |
| ·Western blotting验证目的蛋白表达 | 第38页 |
| ·CYP2D6微粒体蛋白含量的测定 | 第38页 |
| 4 讨论 | 第38-41页 |
| ·CYPs异源表达系统的选择 | 第39-40页 |
| ·重组CYPs的应用及发展前景 | 第40-41页 |
| 第三章 利用荧光底物检测CYP2D6的酶动力学及药物的高通量筛选 | 第41-54页 |
| 1 材料 | 第41-42页 |
| ·酵母微粒体 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·主要溶液 | 第41-42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| 2 方法 | 第42-45页 |
| ·反应条件的优化 | 第42页 |
| ·酶活性鉴定 | 第42-43页 |
| ·酶动力学分析 | 第43-44页 |
| ·酶动力学检测 | 第43页 |
| ·AHMC标准曲线的建立 | 第43-44页 |
| ·酶的稳定性检测 | 第44页 |
| ·温度对酶活性的影响 | 第44页 |
| ·反复冻融对酶活性的影响 | 第44页 |
| ·奎宁丁对重组人CYP2D6野生株的抑制反应 | 第44-45页 |
| ·药物筛选 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-52页 |
| ·线性反应时间和线性酶浓度的确定 | 第45-46页 |
| ·酶活性检测 | 第46-47页 |
| ·AHMC标准曲线的建立 | 第47-48页 |
| ·酶动力学参数的测定 | 第48页 |
| ·酶的稳定性检测 | 第48-49页 |
| ·奎宁丁对人CYP2D6的抑制情况 | 第49-50页 |
| ·药物高通量筛选 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| ·CYP2D6单核苷酸多态性导致酶活性的多态性 | 第52-53页 |
| ·体外药物筛选实验 | 第53-54页 |
| 第四章 HPLC分析重组人CYP2D6的酶动力学 | 第54-67页 |
| 1 材料 | 第54-55页 |
| ·酵母微粒体 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54页 |
| ·主要溶液 | 第54页 |
| ·主要仪器 | 第54-55页 |
| 2 方法 | 第55-57页 |
| ·HPLC条件的确立 | 第55页 |
| ·反应线性条件的优化 | 第55-56页 |
| ·反应时间的优化 | 第55页 |
| ·微粒体浓度的优化 | 第55-56页 |
| ·酶活性检测 | 第56页 |
| ·酶动力学分析 | 第56页 |
| ·标准曲线的建立 | 第56页 |
| ·酶动力学参数的确定 | 第56页 |
| ·奎宁丁的抑制反应 | 第56-57页 |
| ·体外药物筛选实验 | 第57页 |
| 3 结果 | 第57-65页 |
| ·HPLC条件的确立 | 第57-58页 |
| ·反应线性条件的确定 | 第58-59页 |
| ·反应时间线性范围的确定 | 第58页 |
| ·微粒体浓度线性范围的确定 | 第58-59页 |
| ·酶活性检测 | 第59-60页 |
| ·酶动力学分析 | 第60-62页 |
| ·标准曲线的建立 | 第60页 |
| ·酶动力学参数的确定 | 第60-62页 |
| ·奎宁丁对CYP2D6的抑制实验 | 第62-63页 |
| ·体外药物筛选实验 | 第63-65页 |
| 4 讨论 | 第65-67页 |
| ·HPLC与荧光检测方法的比较 | 第65-66页 |
| ·实验数据与报道文献的比较 | 第66-67页 |
| 全文小结 | 第67-69页 |
| 1 结论 | 第67-68页 |
| 2 今后工作展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 已发表文章 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
