致谢 | 第1-9页 |
摘要 | 第9-10页 |
第一章 文献综述 | 第10-31页 |
1. 伪狂犬病毒(PRV)研究进展 | 第10-18页 |
·PRV 的病原学特征 | 第10-13页 |
·PRV 的分类 | 第10页 |
·PRV 基因组结构 | 第10-13页 |
·伪狂犬病病毒诊断方法研究进展 | 第13-15页 |
·病原学方法 | 第13-14页 |
·血清学方法 | 第14-15页 |
·PRV 基因工程疫苗研究进展 | 第15-18页 |
·PRV 基因缺失疫苗 | 第15-17页 |
·PRV 活载体疫苗 | 第17-18页 |
2. 猪细小病毒(PPV)研究进展 | 第18-24页 |
·PPV 病原学的特征 | 第18-19页 |
·PPV 的分子生物学研究进展 | 第19-20页 |
·PPV 的基因组结构 | 第19-20页 |
·PPV DNA 的复制特点 | 第20页 |
·PPV 基因组编码蛋白 | 第20-22页 |
·结构蛋白 | 第20-21页 |
·非结构蛋白 | 第21-22页 |
·PPV 疫苗研究进展 | 第22-24页 |
·PPV 弱毒疫苗 | 第22页 |
·PPV 灭活疫苗 | 第22-23页 |
·PPV 基因工程疫苗 | 第23-24页 |
3. 绿色荧光蛋白(GFP)研究进展 | 第24-31页 |
·GFP 的分子结构 | 第25页 |
·GFP 的生化性质 | 第25-26页 |
·影响GFP 表达强度的因素 | 第26页 |
·GFP 在生物学研究中的应用 | 第26-30页 |
·展望 | 第30-31页 |
第二章 试验研究 | 第31-54页 |
实验一、表达绿色荧光蛋白的猪伪狂犬病病毒与猪细小病毒VP2基因转移载体的构建 | 第31-46页 |
引言 | 第31页 |
1 材料与方法 | 第31-40页 |
·材料 | 第31-34页 |
·方法 | 第34-40页 |
·重组质粒PT-VP2的构建 | 第34-36页 |
·PPV VP2基因的扩增与克隆 | 第36-37页 |
·重组质粒PT-VP2的鉴定 | 第37页 |
·含VP2基因转移质粒PG-VP2的的构建 | 第37-38页 |
·PG 质粒的改造 | 第38页 |
·转移载体PG-VP2 的构建 | 第38-40页 |
·序列测定 | 第40页 |
·重组质粒及细菌的保存 | 第40页 |
2 结果 | 第40-43页 |
·质粒GH 的酶切鉴定 | 第40-41页 |
·PPV VP2 PCR 扩增结果与分析 | 第41页 |
·重组质粒PT-VP2的PCR 鉴定 | 第41-42页 |
·PG 质粒的酶切鉴定与 PCR 扩增鉴定 | 第42页 |
·连接质粒PG-VP2 的酶切鉴定 | 第42-43页 |
·连接质粒PG-VP2 的PCR 鉴定 | 第43页 |
·序列测定 | 第43页 |
3 讨论与分析 | 第43-45页 |
·绿色荧光蛋白基因(GFP)与其他几种报告基因的对比 | 第44页 |
·抽提与胶回收纯化 DNA 的比较 | 第44页 |
·关于伪狂犬病病毒转移载体及构建 | 第44-45页 |
·关于 PRV gG 基因 | 第45页 |
4 结论 | 第45-46页 |
实验二、表达绿色荧光蛋白的猪伪狂犬病病毒与猪细小病毒VP2基因重组病毒的构建 | 第46-54页 |
引言 | 第46页 |
1 材料与方法 | 第46-50页 |
·材料 | 第46-47页 |
·方法 | 第47-50页 |
·细胞的准备 | 第47-48页 |
·PRV 病毒的增殖与收获 | 第48页 |
·病毒DNA 的提取 | 第48页 |
·重组转移载体质粒(PG-VP2)的提取 | 第48-49页 |
·转染用细胞的准备 | 第49页 |
·转移载体质粒(PG-VP2)DNA 与PRV 基因组 DNA 的共转染 | 第49页 |
·重组病毒的筛选与纯化 | 第49-50页 |
2 结果与分析 | 第50-51页 |
2. 1 转移质粒 DNA 的提取 | 第50页 |
·PRV 病毒DNA 的提取 | 第50页 |
·转移载体质粒与病毒DNA 的共转染 | 第50-51页 |
·重组病毒的筛选与纯化 | 第51页 |
3 分析与讨论 | 第51-53页 |
·关于病毒 DNA 的提取 | 第51页 |
·关于转移载体质粒DNA 的提取 | 第51页 |
·转移载体质粒与病毒DNA 共转染效率的优化 | 第51-52页 |
·关于重组病毒的构建 | 第52-53页 |
4 小结 | 第53-54页 |
参考文献 | 第54-63页 |
英文摘要 | 第63页 |